黃芪甲苷對3,4苯并芘(BaP)誘導內皮祖細胞(EPCs)損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:觀察黃芪甲苷對BaP誘導EPCs損傷的保護作用，并探討其保護機制。
　　 方法:（分為兩部分）
　　 （一）黃芪甲苷對BaP損傷EPCs細胞生物學功能的保護作用:利用密度梯度離心法離心收集人臍血單個核細胞(Mononuclear Cell，MNC)，采用細胞貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)EPCs，通過Ⅷ因子相關抗原的免疫細胞化學檢測及Dil標記的乙酰低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)攝取和FITC標記的荊豆凝集素（FITC-UE

2、A-1 lectin）結合雙熒光試驗等方法鑒定細胞。消化收集第4代細胞，隨機分為6組:①正常對照組(Control):不做任何處理;②溶劑對照組(DMSO): DMSO終濃度為:1mL·L-1）;③BaP組:BaP濃度為20μmol·L-1;④黃芪甲苷各組（黃芪甲苷①、黃芪甲苷②、黃芪甲苷③，BaP均為20μmol·L-1）:黃芪甲苷濃度分別為:2，10，50μg·mL-1，上述黃芪甲苷預先保護2小時，再用BaP處理24小時，分別采用細

3、胞計數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)發(fā)檢測細胞增殖能力，粘附能力測定實驗檢測細胞粘附能力，Transwel小室檢測細胞遷移能力。
　　 （二）機制研究:同上消化收集第4代細胞，隨機分為6組:①正常對照組(Control):不做任何處理;②溶劑對照組(DMSO): DMSO終濃度為:1mL·L-1;③BaP組:BaP濃度為20μmol·L-1;④黃芪甲苷各組（黃芪甲苷①、黃芪甲苷②、黃芪甲苷③，BaP

4、均為20μmol·L-1）:黃芪甲苷濃度分別為:2，10，50μg·mL-1，上述各組黃芪甲苷預先保護2小時，再用BaP處理24小時，采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測各組EPCs培養(yǎng)上清液中IL-1β及TNF-α含量;采用免疫印跡法(WesternBlotting，WB)檢測各組EPCs總蛋白中高級糖基化終產物受體(RAGE)蛋白的含量。
　　 結果:
　　 （一）黃芪甲苷對BaP損傷EPCs細胞生物學功能的保護

5、作用；
　　 1.EPCs的鑒定:通過密度梯度離心法以及細胞貼壁培養(yǎng)能成功培養(yǎng)出EPCs，細胞形態(tài)學觀察顯示為鋪路石樣結構;EPCs特征性標志物表達陽性。
　　 2.與正常對照組相比，BaP組細胞的增殖能力、粘附能力以及遷移能力均明顯降低(P＜0.05);與BaP組相比，黃芪甲苷各組細胞的增殖能力、粘附能力以及遷移能力均明顯增高(P＜0.05)，黃芪甲苷濃度越大，各組細胞生物學功能越趨向于正常對照組(P＜0.05)。

6、r>　　 （二）機制研究；
　　 培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α變化:與正常對照組相比，BaP組培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α含量均明顯提高(P＜0.01);與BaP組相比，黃芪甲苷各組培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α含量明顯下降(P＜0.01)，并且隨著黃芪甲苷濃度的增高呈現(xiàn)出遞減的趨勢(P＜0.05)。
　　 細胞RAGE蛋白變化:與正常對照組相比，BaP組細胞總蛋白RAGE蛋白的表達量明顯提高(P