貫葉連翹提取物對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病的治療作用及其機(jī)理研究.pdf

1、背景和目的:擴(kuò)張型心肌病(Dilated cardiomyopathy，DCM)發(fā)病率高，至今尚無特異性治療藥物或方法，慢性充血性心力衰竭、心律失常、猝死等是其常見的并發(fā)癥，嚴(yán)重危害人類健康。其發(fā)病相關(guān)因素或疾病主要是:病毒性心肌炎、免疫性心肌炎、遺傳以及其他免疫因素等。西藥因其副作用大且效果欠佳而使用受限，中藥應(yīng)用日益受到重視。本課題組前期研究表明:貫葉連翹提取物(Hypericumperforatum extract，HPE)具有顯

2、著的抗B型柯薩奇病毒和保護(hù)心肌細(xì)胞作用，抑制心肌細(xì)胞凋亡，明顯改善心肌纖維化;對(duì)豬心肌肌球蛋白誘導(dǎo)的免疫性心肌炎小鼠，可顯著減少Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)，減輕心肌纖維化程度，同時(shí)抑制炎性細(xì)胞的組織浸潤(rùn)。在此基礎(chǔ)上，本課題利用HPE灌胃給藥，治療阿霉素誘導(dǎo)的DCM大鼠，觀察HPE對(duì)DCM大鼠的血流動(dòng)力學(xué)及心肌縫隙連接蛋白43(Connexin43，Cx43)的影響，結(jié)合超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、一氧

3、化氮(Nitric oxide，NO)水平以及腦鈉肽激素(Brain natriureticpeptide，BNP)水平，來探討HPE可能的治療作用及機(jī)制。
　　方法:
　　1.復(fù)制阿霉素誘導(dǎo)的DCM模型:健康雄性Wistar大鼠，體重185±22g，編號(hào)，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（C組，n=10）及模型組（M組，n=46），阿霉素腹腔注射（3.0mg/kg/w×6w），停藥觀察2周，復(fù)制DCM模型。眼眶取血測(cè)定血漿BNP含量，結(jié)

4、合大鼠心肌病理切片HE染色、Masson染色觀察，輔以大鼠造模期間活動(dòng)變化、腹水情況以及死亡率綜合評(píng)定DCM模型。
　　2.HPE對(duì)DCM大鼠的治療作用:造模第9周，將M組模型成功的大鼠隨機(jī)分為DCM模型組(DCM組，n=15)和治療組（HPE組，n=13），HPE組灌胃HPE100 mg/kg，每天2次，連續(xù)30 d，正常對(duì)照組(CON組)及DCM組對(duì)應(yīng)給予等量生理鹽水。治療結(jié)束后，大鼠眼眶取血，離心后測(cè)血漿BNP濃度，生理記錄

5、儀檢測(cè)大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo);大鼠主動(dòng)脈取血，離心制備上層血清，測(cè)NO含量;無痛處死大鼠，各組取心肌右心室制備心肌組織勻漿，測(cè)定一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和SOD的含量;取各組大鼠心肌左心室病理切片HE、Masson染色及免疫組化;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠右心室心肌縫隙連接蛋白43(Connexin43，Cx43)的變化。
　　結(jié)果:血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)HPE治療后，在大鼠心肌

6、收縮功能方面:HPE組大鼠LVSP，+dP/dtmax顯著升高，與DCM組相比差異明顯(p＜0.05);在舒張功能方面:大鼠LVEDP顯著降低，-dP/dtmax顯著升高，與DCM組比較，差異顯著(p＜0.05); HPE組大鼠血漿BNP含量顯著低于DCM組(p＜0.01);HPE組大鼠血清中的NO和心肌勻漿中NOS含量與DCM相比，差異顯著(p＜0.01);大鼠心肌組織勻漿檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與DCM組相比，HPE組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA顯著減

7、少(p＜0.05)，抗氧化物SOD的含量顯著升高(p＜0.05);心肌病理Masson染色發(fā)現(xiàn)，DCM組間質(zhì)膠原大量分布，心肌纖維化程度嚴(yán)重，免疫組化顯示DCM組大鼠心肌Cx43表達(dá)顯著降低，RT-PCR研究表明HPE顯著提高大鼠心肌Cx43 mRNA表達(dá)，與DCM組比較差異有顯著性(p＜0.001)。
　　結(jié)論:本研究應(yīng)用阿霉素腹腔注射雄性Wistar大鼠，成功誘導(dǎo)出DCM模型;100mg/kg HPE治療后，可以明顯升高血清N