鹽酸伊伐布雷定片人體藥代動力學(xué)研究.pdf

1、伊伐布雷定是法國Servier公司首先研制開發(fā)的抗心絞痛新藥，大量研究證實其安全有效性，2005年11月經(jīng)歐洲藥審局批準(zhǔn)在歐洲27個國家上市，用于治療對β受體阻斷劑禁忌或不能耐受的慢性穩(wěn)定性心絞痛。該藥是首個選擇特異性心臟起搏電流（If）抑制劑，起到減緩竇房結(jié)起搏點活動速度的作用，與傳統(tǒng)藥物相比，其作用機(jī)理不影響血壓、血流動力學(xué)、心肌收縮力、房室傳導(dǎo)或心室復(fù)極。
　　目的：目前國內(nèi)文獻(xiàn)尚未有關(guān)鹽酸伊伐布雷定片的人體藥代動力學(xué)的報道

2、，本研究擬探索并建立LC-MS/MS法(高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法)檢測人血漿中伊伐布雷定的方法，并將該方法應(yīng)用于對單次及多次給藥后伊伐布雷定在健康人體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征的研究，首次闡明鹽酸伊伐布雷定片在中國健康受試者中藥代動力學(xué)特征，探討藥物在人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的動態(tài)變化特點，闡明其處置規(guī)律，為鹽酸伊伐布雷定片的Ⅱ期臨床試驗研究設(shè)計和給藥劑量方案的確定提供參考依據(jù)，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：本研究分以下三部

3、分
　　第一部分：建立特異性好、靈敏度高、重復(fù)性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好的LC-MS/MS檢測方法。檢測步驟：于10mL離心管中精密加空白血漿樣品1mL，內(nèi)標(biāo)溶液(2?g·mL-1)50?L，旋渦30s混勻。加入4mL乙酸乙酯，漩渦3min，于4000r·min-1離心10min。吸取有機(jī)層至另一干凈離心管中，于30℃水浴中以氮氣流吹至近干。殘渣以200?L流動相復(fù)溶，于16000r·min-1離心8min，吸取上清液轉(zhuǎn)移至自動進(jìn)樣器樣品管中

4、，進(jìn)樣量5L，進(jìn)行LC-MS/MS分析。
　　第二部分：研究單次給藥后鹽酸伊伐布雷定片在健康受試者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。將30名健康受試者隨機(jī)平行分為3組，每組健康受試者各10名（男女各半），低、中、高三個劑量分別單次口服2.5mg、5.0mg、7.5mg鹽酸伊伐布雷定片，采血點分別為：給藥前，給藥后8、15、30、45min和1、1.5、2、3、4、6、9、12、24、36、48h分別采集靜脈血4mL，置肝素抗凝的試管中，離心分

5、離出血漿置普通干燥試管中，于-20℃保存，待測。用LC-MS/MS法測定血漿中的伊伐布雷定濃度，用DAS2.0軟件計算藥動學(xué)參數(shù)。
　　第三部分：研究多次給藥后鹽酸伊伐布雷定片在健康受試者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。多次給藥試驗在單次給藥試驗結(jié)束后進(jìn)行，單次給藥的低、中、高三個劑量組繼續(xù)給藥，每次給藥量為2.5mg、5.0mg、7.5mg，每日2次，連續(xù)給藥7天。多次給藥的采血點為：第4～7天早上給藥前，第7天給藥后8、15、30、45

6、min和1、1.5、2、3、4、6、9、12、24、36、48h靜脈血4mL，置于肝素化的試管中，離心分離血漿置-20℃儲藏，待測。用LC-MS/MS法測定血漿中的鹽酸伊伐布雷定濃度，用DAS2.0軟件計算藥動學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1.本試驗建立的人血漿中伊伐布雷定測定方法特異性好、靈敏度高、重復(fù)性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好；伊伐布雷定標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.101-101ng·mL-1，線性關(guān)系良好；最低檢測限為0.101ng·mL-

7、1；高、中、低三種濃度的批內(nèi)和批間精密度RSD均小于15.0％；樣品和內(nèi)標(biāo)提取回收率都在70％以上；介質(zhì)效應(yīng)測定結(jié)果；穩(wěn)定性考察等均符合生物樣品測定要求。去甲伊伐布雷定標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.085-25.5ng·mL-1，線性關(guān)系良好；最低檢測限為0.085ng·mL-1；高、中、低三種濃度的批內(nèi)和批間精密度RSD均小于15.0％；樣品和內(nèi)標(biāo)提取回收率都在70％以上；介質(zhì)效應(yīng)測定結(jié)果；穩(wěn)定性考察等均符合生物樣品測定要求。
　　2.

8、30名健康受試者單次給予鹽酸伊伐布雷定片（2.5mg、5.0mg、7.5mg）后，其體內(nèi)伊伐布雷定藥代動力學(xué)參數(shù)分別為：Tmax：0.85±0.43h、1.15±0.24h、1.00±0.46h；Cmax：14.92±4.05ng·mL-1、35.98±8.68ng·mL-1、48.62±9.62ng·mL-1；t1/2：3.87±1.30h、5.03±1.19h、5.00±1.84h；AUC0-t：64.23±13.87ng·mL-1

9、、169.60±33.09ng·mL-1、215.92±57.21ng·mL-1；AUC0-∞：64.88±13.97ng·mL-1、171.19±33.45ng·mL-1、217.95±56.42ng·mL-1；CLZ/F：0.04±0.01、0.03±0.01L?h-1、0.04±0.01L?h-1；VZ/F：0.23±0.09L、0.21±0.03L、0.26±0.10L。去甲伊伐布雷定藥代動力學(xué)參數(shù)分別為：Tmax：1.08±0

10、.75h、1.30±0.26h、1.13±0.48h；Cmax：1.81±0.73ng·mL-1、3.11±1.61ng·mL-1、6.26±1.02ng·mL-1；t1/2：8.15±3.09h、9.64±1.32h、10.78±2.67h；AUC0-t：13.28±3.26ng·mL-1、23.33±9.17ng·mL-1、43.94±9.22ng·mL-1；AUC0-∞：15.04±3.09ng·mL-1、25.39±9.49ng

11、·mL-1、46.87±10.05ng·mL-1；CLZ/F：0.17±0.04L?h-1、0.24±0.13L?h-1、0.17±0.03L?h-1；Vz/F：2.11±1.31L、3.22±1.54L、2.50±0.38L。
　　3.30名健康受試者多次給予鹽酸伊伐布雷定片（2.5mg、5.0mg、7.5mg）后，伊伐布雷定的藥代動力學(xué)參數(shù)為：Tmax：0.85±0.44h、1.08±0.53h、1.05±1.05h；Cmax

12、：18.32±3.27ng·mL-1、37.88±10.56ng·mL-1、50.01±17.46ng·mL-1；t1/2：4.55±1.62h、6.68±2.05h、7.15±1.90h；AUC(0-48)：93.40±22.86ng·mL-1、209.89±71.26ng·mL-1、326.49±135.05ng·mL-1；AUCss：79.78±16.87ng·mL-1、165.61±50.30ng·mL-1、243.61±87.

13、08ng·mL-1；CL/F：0.03±0.01L?h-1、0.03±0.01L?h-1、0.03±0.01L?h-1；Vd/F：0.18±0.06L、0.25±0.09L、0.27±0.15L。多次給藥后去甲伊伐布雷定的藥代動力學(xué)參數(shù)為：Tmax：0.83±0.47h、1.23±0.80h、1.30±1.43h；Cmax：2.60±0.83ng·mL-1、4.94±1.76ng·mL-1、7.59±1.79ng·mL-1；t1/2：1

14、1.47±2.83h、14.25±2.44h、13.79±3.23h；AUC(0-48)：30.15±9.77ng·mL-1、58.05±19.92ng·mL-1、102.19±20.72ng·mL-1；AUCss：17.51±5.11ng·mL-1、30.54±10.21ng·mL-1、52.83±12.94ng·mL-1；CL/F：0.09±0.05L?h-1、0.09±0.05L?h-1、0.07±0.01L?h-1；Vd/F：1

15、.33±0.30L、1.83±0.76L、1.37±0.34L；低中高三個劑量組的蓄積因子分別為：1.44±0.22，1.21±0.37，1.51±0.59。
　　結(jié)論：
　　1.本實驗建立的人血漿中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定LC-MS/MS檢測方法精密度高，準(zhǔn)確性好，選擇性強(qiáng)，重現(xiàn)性良好，適用于人血漿中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定的藥代動力學(xué)研究。
　　2.單次給藥低、中、高三個劑量組血漿中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定C