Cdx2對胃癌生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的研究.pdf

1、廣西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Cdx2對胃癌生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的研究姓名：李雷申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：肖強(qiáng)20090601和理論依據(jù)，指導(dǎo)進(jìn)一步的臨床應(yīng)用；最終通過基因芯片掃描技術(shù)研究C d x 2 過表達(dá)引起的基因表達(dá)譜改變情況，探討其在胃癌細(xì)胞中產(chǎn)生作用的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括以下四部分：第一部分C d x 2 真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對胃癌細(xì)胞M G C ．8 0 3 生物學(xué)行為的影響目的：通過構(gòu)建人同源基因C d

2、 x 2 真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞M G C ．8 0 3 ，觀察過表達(dá)C d x 2 基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)性狀的影響。方法：從人胃癌組織中擴(kuò)增出C d x 2 基因的O R F 全長，構(gòu)建p C M V - C d x 2 ．H A 真核表達(dá)載體；脂質(zhì)體介導(dǎo)法瞬時轉(zhuǎn)染p C M V - H A 和p C M V - C d x 2 ．H A 至人胃癌細(xì)胞M G C ．8 0 3 ，兩組細(xì)胞命名為M G C ．8 0 3 ／E V ，

3、M G C ．8 0 3 ／C d x 2 。應(yīng)用R T - P C R 檢測各組C d x 2 基因的m R N A 表達(dá)情況，W e s t e r n b l o t 檢測各組C d x 2 蛋白的表達(dá)情況。M T r法觀測細(xì)胞增殖，透射電鏡觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，流式細(xì)胞儀分析各組細(xì)胞周期和凋亡。結(jié)果：成功構(gòu)建p C M V - C d x 2 ．H A 真核表達(dá)載體，在瞬時轉(zhuǎn)染4 8 h的M G C ．8 0 3 ／C d

4、x 2 組細(xì)胞中檢測到較高水平C d x 2 基因的m R N A 和蛋白表達(dá)。與未轉(zhuǎn)染組、M G C ．8 0 3 ／E V 組比較：M G C - 8 0 3 ／C d x 2 組的胃癌細(xì)胞在轉(zhuǎn)染7 2 h 時生長受到明顯抑制，細(xì)胞周期G o ／G ，期比例上升，S 期比例下降，胃癌細(xì)胞的凋亡率也明顯升高( P < O ．0 5 ) 。透射電鏡顯示M G C ．8 0 3 ／C d x 2 組的胃癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡表現(xiàn)。結(jié)論