Cdx2和E2F-1基因對胃癌細胞生物學性狀影響的研究.pdf

1、我國胃癌發(fā)病率仍然居所有癌腫的第一位，死于胃癌人數(shù)約占全球該病死亡總人數(shù)的1/4。多數(shù)患者為進展期晚期胃癌，手術根治率低，術前術后放化療效果差，毒副作用大，至今沒有統(tǒng)一的化療方案，因而腫瘤的基因治療有望成為一種新的治療策略。細胞的失調控的異常增殖和凋亡的抑制是腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。Cdx2是最近發(fā)現(xiàn)的特異性核轉錄因子，最早由Mlodzik于果蠅中分離成功，發(fā)現(xiàn)與parahox家族呈高度的同源性。在正常生物發(fā)育過程中，Cdx2對消化道特別是

2、結腸和小腸上皮的發(fā)育起著關鍵的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Cdx2基因過表達可抑制結腸癌的侵襲和轉移。關于E2F-1基因，最初被認為是一致癌基因，因為它通過刺激細胞周期從G1期向S期轉變的基因表達，可以促進細胞的增殖。并且E2F-1的過度表達可以刺激靜止期細胞向S期轉變。此外，在HNSCC細胞株中，E2F-1的過度表達可以刺激細胞重新進入細胞周期，并增加細胞的侵襲力，這些表明E2F-1在細胞周期的進展和轉移中起到致癌基因的作用。另一方面，在多種細胞

3、中，過度表達E2F-1可以誘導細胞凋亡，表明是一種抑癌基因。而且，最近研究，敲除E2F-1基因的小鼠也表明了其抑癌基因的作用。 本研究擬通過體外實驗，探討Cdx2和E2F-1基因對胃癌細胞生物學性狀的影響，分析Cdx2和E2F-1基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 1方法1.1 瞬時轉染胃癌細胞并鑒定Cdx2和E2F-1基因的表達利用脂質體Lipofectamine 2000瞬時轉染MGC-803胃癌細胞，抽提轉染48h后細

4、胞總RNA和蛋白，通過RT-PCR和 Western blot檢測Cdx2和E2F-1在mRNA水平和蛋白質水平的表達情況。 1.2轉染后的體外實驗實驗分三組，取48h轉染pCMV-Cdx2-HA 和pCMV-E2F-1-HA細胞為實驗組，轉染pCMV-HA和未轉染MGC-803分別為空白對照組和陰性對照組。鑒定轉染Cdx2和E2F-1成功的MGC-803細胞分別做侵襲實驗、粘附實驗、劃痕實驗、克隆實驗和測定細胞凋亡率。

5、 2結果 2.1瞬時轉染后應用RT-PCR和Western blot分別檢測到了Cdx2和E2F-1基因的表達。 2.2轉染pCMV-Cdx2-HA質粒的MGC-803細胞的侵襲力、粘附能力、遷移能力和增殖力較轉染pCMV-HA質粒的MGC-803細胞和未轉染的MGC-803細胞明顯降低(P