布比卡因?qū)Ψ紊掀るx子轉(zhuǎn)運(yùn)的作用研究.pdf

1、前言
　　肺內(nèi)正常的解剖結(jié)構(gòu)和生理機(jī)制保持著肺間質(zhì)的水分恒定和肺泡處于理想的濕潤狀態(tài)，以利于完成肺的各種功能。肺泡液體清除率(alveolarfluidclearance，AFC)對肺臟生理和病理狀態(tài)下的液體平衡，如肺水腫、急性肺損傷和成人呼吸窘迫癥，均起重要的調(diào)控作用。增加AFC能加速肺水腫的恢復(fù)，改善肺泡上皮的氣體交換。相反，減少AFC能降低急性肺損傷和成人呼吸窘迫癥病人的生存率，誘發(fā)肺水腫的發(fā)生。最近的臨床報(bào)道表明布比卡因頸

2、叢麻醉及布比卡因過敏均可致急性肺水腫，但具體機(jī)制尚不清楚。肺泡上皮細(xì)胞頂側(cè)膜的上皮鈉通道(epithelialsodiumchannel，ENaC)是影響AFC的主要決定因素，我們推測布比卡因可能通過抑制ENaC而降低AFC。本研究旨在探討布比卡因與AFC之間的關(guān)系，明確布比卡因是否對肺泡上皮Na+轉(zhuǎn)運(yùn)有抑制作用及其相應(yīng)的分子機(jī)制。
　　材料與方法
　　健康昆明雄性小鼠麻醉后經(jīng)氣管插管注入0.3ml等滲5％小牛血清白蛋白(b

3、ovineserumalbumine，BSA)，實(shí)驗(yàn)共分六組:分別為對照組、阿米洛利組、布比卡因組、布比卡因+可米洛利組、特布他林組及布比卡因+特布他林組。BSA液中，分別含有空白、1mmol.L-1阿米洛利、1mmol.L-1布比卡因、1mmol.L-1布比卡因+1mmol.L-1阿米洛利、0.1mmol.L-1特布他林及1mmol.L-1布比卡因+0.1mmol.L-1特布他林。30min后負(fù)壓吸取肺泡內(nèi)液體，測定肺泡液體內(nèi)小牛血清

4、白蛋白的濃度并計(jì)算AFC。采取手術(shù)切除人肺標(biāo)本在離體人肺注入10ml等滲5％BSA，30min后負(fù)壓吸取肺泡內(nèi)液體，測定肺泡液體內(nèi)小牛血清白蛋白的濃度并計(jì)算AFC。實(shí)驗(yàn)共分四組:分別為對照組、阿米洛利組、布比卡因組、布比卡因+阿米洛利組。H441細(xì)胞應(yīng)用RPMI1640培養(yǎng)基(ATCC)，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)，并置于帶孔濾膜上生長備用(CorningCostar)。分別用1μM、10μM、100μM、1mM、10mM布比卡因濃

5、度刺激H441細(xì)胞單層，并于尤斯灌流室系統(tǒng)上測定其短路電流的變化。用30μg/ml布比卡因處理H441細(xì)胞，做0，15min，30min，1h四個時(shí)間點(diǎn)，提取蛋白用于westernblot，研究布比卡因?qū)rk1/2蛋白磷酸化的影響。
　　結(jié)果
　　1、氣管內(nèi)注入布比卡因后，能顯著降低小鼠AFC
　　其降低程度與使用特異性鈉通道阻斷劑阿米洛利相似，布比卡因與阿米洛利合用后抑制效應(yīng)未見進(jìn)一步增強(qiáng)。β2腎上腺素能受體激動劑

6、特布他林能明顯增加小鼠AFC。與布比卡因合用后，特布他林能拮抗布比卡因?qū)FC的抑制作用。
　　2、氣管內(nèi)注入布比卡因后，能顯著降低人肺AFC
　　其降低程度與使用特異性鈉通道阻斷劑阿米洛利相似，布比卡因與阿米洛利合用后抑制效應(yīng)未見進(jìn)一步增強(qiáng)。
　　3、布比卡因降低阿米洛利敏感性電流
　　其降低作用隨藥物濃度增加而增強(qiáng)，其半數(shù)抑制濃度為98.1μM。
　　4、布比卡因?qū)rk1/2蛋白磷酸化的影響。