安徽地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征血清學(xué)和分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、PRRSV嚴重影響世界養(yǎng)豬業(yè)。自2006年高致病性PRRSV在我國引起大規(guī)模豬群發(fā)病，PRRSV一直成為研究熱點。PRRSV基因組容易發(fā)生變異，其中GP5蛋白是變異最為顯著的結(jié)構(gòu)蛋白，通過對PRRSV流行毒株的GP5蛋白的克隆、測序與分析，有利于弄清PRRSV遺傳變異情況，可為PRRS的防治提供重要的理論依據(jù)。
　　本研究對安徽省部分地區(qū)的豬場進行了PRRS血清學(xué)和分子流行病學(xué)調(diào)查，旨在弄清安徽省近年來PRRS感染情況及遺傳變異情

2、況，為安徽省PRRS防控提供一些參考。內(nèi)容分為以下四個方面：
　　血清學(xué)調(diào)查。2014年10月到2015年9月，對安徽省部分地區(qū)44家疑似發(fā)生PRRSV的豬場采集血清，采集未經(jīng)PRRS疫苗免疫的血清，利用ELISA對其進行抗體檢測。調(diào)查顯示，從44個發(fā)病豬場采集的71份血清樣品中檢出33份陽性，其陽性檢出率為46.48％，豬場陽性率為40.91%。初步認為安徽省部分豬場存在PRRS的自然感染現(xiàn)象。并以500頭以上規(guī)模豬場的場檢出率

3、較高，達50.00%；100頭以下規(guī)模的病豬血清樣品檢出率最高達69.57%。且不同年齡段豬均有PRRS感染，其中尤其以2個月以上的體重在伴有體重100斤左右的豬群發(fā)病率最高。
　　病原學(xué)調(diào)查。對2014年10月至2015年9月期間安徽省的13個市，總計119家疑似發(fā)病豬場，211例疑似病例采用實驗室建立的RT-PCR進行檢測，對檢測陽性的病例進行了臨床癥狀觀察和解剖病理變化的觀察，并進行統(tǒng)計分析。其中44份檢測為陽性，陽性率為2

4、0.85%，豬場陽性率為25.21%。結(jié)果表明PRRSV感染對各階段的豬群都能夠感染，其中哺乳仔豬和保育豬死亡率和發(fā)病率最高，母豬和育肥豬次之。
　　發(fā)生PRRS的30家豬場主要臨床特征為母豬發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；對29頭送檢的活體發(fā)病豬進行體溫測量，在39.6℃-42℃之間。經(jīng)過每月的發(fā)病豬數(shù)量分析可發(fā)現(xiàn)PRRS可全年發(fā)病，在發(fā)病的同時多引起繼發(fā)感染和混合感染。
　　解剖可看到主要病變?yōu)榉闻K間質(zhì)性肺炎。對采集典型病料

5、進行了石蠟切片的制備及HE染色，顯微鏡下觀察病理組織學(xué)變化。其中肺泡間隙明顯加大，肺泡壁增厚，肺泡破裂形成空腔，且肺小支氣管管腔內(nèi)有分泌物，假復(fù)層柱狀纖毛上皮與粘膜纖毛上皮呈環(huán)狀分離即將脫落，有大量的巨噬細胞和淋巴細胞浸潤，組織切片的觀察結(jié)果與宏觀病變相符。
　　安徽流行毒株遺傳進化分析。對16份PRRSV陽性病料中的ORF5基因進行擴增和序列測定。經(jīng)過16份陽性樣品的ORF5基因核苷酸進行同源性比較發(fā)現(xiàn)：安徽毒株之間ORF5基因

6、序列之間的核苷酸序列相似度為88.9%-100%；與歐洲型毒株ORF5基因序列之間的核苷酸序列相似度為60.0%-63.3%；與JXA1、HUN4、TJ等美洲型高致病性PRRSV ORF5基因序列之間的核苷酸序列相似度88.1%-98.5%。這一結(jié)果顯示安徽省流行的PRRSV毒株主要屬于美洲型。將其與安徽省周邊省市的流行毒株比較，結(jié)果與JS-B、JS/NT/2013（上海）毒株核苷酸序列相似度為85.5%-99.3%；JXA1（江西）毒

7、株核苷酸序列相似度為89.7%-99.7%；06-JS-1、06-JS-2（浙江）毒株核苷酸序列相似度為89.7%-99.3%。
　　構(gòu)建遺傳進化樹可以看出安徽毒株與我國2006年以后發(fā)生的HP-PRRSV毒株JXA1、HUN4、TJ等在同一分支上，同源關(guān)系較近，可能是由相同毒株變異而來。
　　通過蛋白氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)其中14份安徽流行毒株與高致病性PRRSV高度同源，另2份與經(jīng)典PRRSV高度同源。決定病毒毒種的34aa

8、，有14株毒株均由天冬氨酸（D）變?yōu)樘於０罚∟）發(fā)生了變異。
　　綜上所述，安徽省部分豬場的不同階段的豬都存在自然感染現(xiàn)象；在發(fā)病豬場臨床癥狀不明顯，保育豬死亡率最高；通過病理組織學(xué)觀察，顯微鏡下觀察病理組織學(xué)變化與宏觀病變相符；與國內(nèi)外的流行毒株進行對比可發(fā)現(xiàn)，安徽省流行毒株屬于美洲型，且與國內(nèi)高致病性PRRS毒株JXA1、HUN4、TJ等相似，可能由同一個毒株變異而來。通過調(diào)查分析了解安徽地區(qū)PRRSV流行情況，為更好的防控