廣西豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5～7基因的克隆、序列分析及分子流行病學(xué)調(diào)查研究.pdf

1、本研究通過RT-PCR方法對廣西不同地方疑似PRRS的病料進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)精液、流產(chǎn)死胎、淋巴結(jié)、腎臟均能檢出PRRSV，說明除肺臟外，病毒還可以在其他組織中存在。通過對精液和流產(chǎn)死胎毒株的ORF5基因進(jìn)行克隆和序列分析，發(fā)現(xiàn)核苷酸和氨基酸同源性為100﹪，進(jìn)一步證實(shí)PRRS可以通過感染PRRSV的精液進(jìn)行垂直傳播。 對PRRS陽性病料ORF5～7基因的全長序列克隆和序列分析，得到12個ORF5基因，8個ORF6基因和5個ORF7

2、基因，結(jié)果表明與CH-1a、HB-1、FJ-1、BJ-4、VR-2332、疫苗株等毒株相比的ORF5、ORF6、ORF7基因的核苷酸同源性為87.2～97.3﹪、90.1～97.9﹪、90.1～98.4﹪，氨基酸同源性為85.1～96.0﹪、92.0～97.1﹪、87.9～96.8﹪。與LV株序列相比核苷酸分別為62.2～64.0﹪、68.2～68.8﹪、65.6～67.5﹪，氨基酸同源性分別為55.7～56.2﹪、75.9～78.2﹪

3、、55.6～58.9﹪。遺傳進(jìn)化樹表明廣西流行毒株分別屬于3個亞群Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ，本研究的12株屬于Ⅱ亞群，除GXWX株在ORF5基因進(jìn)化樹中與美國準(zhǔn)種變異代表株B2親緣關(guān)系較近外，其他毒株3個基因的進(jìn)化樹均與HB-1株的親緣關(guān)系較近，推斷廣西流行毒株可能源于同一毒株。推導(dǎo)編碼氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，12個毒株與疫苗株無相關(guān)，均源自野毒株；除GXWX外，其余11株均具有準(zhǔn)種特征；主要抗原表位發(fā)生變異，以胞外區(qū)(27～41aa)變異較為明顯。OR

4、F6基因序列分析發(fā)現(xiàn)，變異主要集中在10～19位和60～70位，GXXY在C末端(167～174aa)變異最大。ORF7基因序列分析，發(fā)現(xiàn)GXWX和GXWZ-2毒株保守性較差，同源性分別為87.9﹪和88.7﹪。GXWX毒株在N蛋白上存在新的潛在糖基化位點(diǎn)N99Y100T101，GXWZ-2毒株失去糖基化位點(diǎn)。5個重要的抗原決定簇均發(fā)生一定程度的變異，其中在中心區(qū)域(52～69aa)，GXWX發(fā)生突變，由天門冬氨酸(D)突變?yōu)楣劝彼?E