短暫缺血缺氧后神經(jīng)頓抑現(xiàn)象中離子通道的研究.pdf

1、在已建立的神經(jīng)頓抑模型上研究各種離子通道的改變，為研究短暫缺氧血清剝奪/復(fù)氧復(fù)注血清后尋找神經(jīng)細(xì)胞頓抑現(xiàn)象存在的確切證據(jù)并探討其演變規(guī)律、探索短暫性腦缺血再灌流后產(chǎn)生的神經(jīng)細(xì)胞頓抑現(xiàn)象的本質(zhì)與特點(diǎn)、揭示神經(jīng)細(xì)胞頓抑現(xiàn)象在短暫性局灶性腦缺血后細(xì)胞損傷和自身調(diào)節(jié)保護(hù)機(jī)制中可能的生物學(xué)作用與意義。將細(xì)胞分為對(duì)照組和缺血組，應(yīng)用電生理膜片鉗技術(shù)記錄缺氧復(fù)氧后海馬神經(jīng)元的各種鉀通道的電流活動(dòng)。經(jīng)p-CLAMP軟件進(jìn)行采樣儲(chǔ)存數(shù)據(jù)，用sigmapl

2、ot8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理和圖像分析。缺血缺氧再灌流后KATP電流增加，在復(fù)氧2小時(shí)后電流達(dá)到最大值，然后逐漸下降，其他的鉀電流有所下降，當(dāng)KATP電流逐漸恢復(fù)的時(shí)候，其他的電流有所增大。用KATP阻斷劑格列苯脲后，其他的鉀電流增大。胞內(nèi)透析PKC阻制劑H-7，KATP通道可以被阻斷。在短暫缺氧血清剝奪復(fù)氧復(fù)注血清后，存在各種K+離子通道活動(dòng)頻繁改變，其中以KATP為重點(diǎn)研究對(duì)象，隨著復(fù)氧時(shí)間的延長(zhǎng)，可以部分恢復(fù)。因此對(duì)于缺血再灌流后

3、存在神經(jīng)頓抑現(xiàn)象提供有力的佐證。 骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MSCs)又叫骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞1。是成年哺乳動(dòng)物骨髓中存在的特殊的非造血組織干細(xì)胞，具有多種分化潛能2。我室褚倩3等人對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)樣細(xì)胞利用免疫組化和westemblot進(jìn)行了鑒定，發(fā)現(xiàn)在利用二甲基亞砜(DSMO)和丁羥茴醚(BHA)誘導(dǎo)分化后，大部分MSCs變成雙極，多極和雛形，并相互交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，巢蛋白(Nestin)在誘導(dǎo)分化前不表達(dá)，在誘導(dǎo)分化后6h

4、達(dá)到最高,24小時(shí)和48小時(shí)逐漸降低。神經(jīng)元特異核蛋白(NeuN)在誘導(dǎo)分化前不表達(dá)，在誘導(dǎo)分化后6小時(shí)出現(xiàn)表達(dá),24小時(shí)和48小時(shí)表達(dá)增強(qiáng)。因此得出結(jié)論,MSCs經(jīng)體外誘導(dǎo)先分化為神經(jīng)干細(xì)胞，然后分化為神經(jīng)樣細(xì)胞。但是對(duì)于該神經(jīng)樣細(xì)胞是否具有電生理特性未作研究，國(guó)內(nèi)也未見(jiàn)相關(guān)類型的報(bào)道.本文在以往人員的講究基礎(chǔ)上，利用電生理膜片箝技術(shù)對(duì)分化的神經(jīng)樣細(xì)胞進(jìn)行了離子通道的研究，觀察其是否具有電生理特性。 本文利用電生理膜片箝技術(shù)共檢