高三尖杉酯堿對DLBCL細(xì)胞株誘導(dǎo)分化及凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及目的
　　彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DiffuselargeB-celllymphoma，DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤亞型中發(fā)病率最高的亞型，約占成人非霍奇金淋巴瘤的30％-40％，是一組具有高度侵襲性及伴高度異質(zhì)性的惡性腫瘤。根據(jù)免疫表型分為生發(fā)中心B細(xì)胞樣亞型(germinalcenterB-celllike，GCB)、活化B細(xì)胞樣亞型(activatedB-celllike，ABC)和第三型，GCB型預(yù)后明顯好于其他兩種亞型

2、。隨著CD20分子靶向藥物利妥昔單抗聯(lián)合經(jīng)典化療方案的免疫學(xué)療法展開，顯著提高了DLBCL患者的完全緩解率和無病生存率，但是仍有一部分患者對免疫學(xué)療法不敏感或早期復(fù)發(fā)。
　　高三尖杉酯堿（homoharringtonine，HHT）系從粗榧類植物總生物堿中提取出的一種生物堿，是我國自主研發(fā)成功的高效抗腫瘤藥物。目前臨床主要用于急性髓系白血病、慢性粒細(xì)胞白血病和骨髓增生異常綜合癥的治療。體外研究發(fā)現(xiàn)HHT對多種腫瘤細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡作

3、用，而HHT作用于DLBCL的研究目前尚無相關(guān)報道。本實(shí)驗(yàn)通過將HHT作用于DLBCL細(xì)胞株，觀察作用前后DLBCL細(xì)胞形態(tài)和功能的變化，探討HHT體外對DLBCL細(xì)胞的增殖、分化及端粒酶活性的影響，同時比較GCB和ABC亞型間反應(yīng)差異，證實(shí)HHT具有抗DLBCL的作用，豐富了HHT的抗腫瘤作用譜，為臨床開展HHT作為單藥或聯(lián)合其他藥物用于DLBCL的治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)室資料。
　　方法
　　1、將不同濃度、不同時間HH

4、T作用于SU-4、LY-3細(xì)胞株，AnnexinV/FITC雙標(biāo)法流式檢測細(xì)胞凋亡率。瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài)。并以相同濃度HHT作用于MCF-7、SGC-7901、Kasumi-1、K562細(xì)胞進(jìn)行不同作用時間細(xì)胞凋亡率比較。
　　2、將20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3細(xì)胞株，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同作用時間的細(xì)胞周期變化。
　　3、將20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3細(xì)胞株，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同作用時間細(xì)胞

5、表面抗原CD19、CD138、IgD及IgM的表達(dá)變化。
　　4、將20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3細(xì)胞株，TRAP-銀染法測定不同作用時間細(xì)胞端粒酶活性變化。
　　結(jié)果
　　1、HHT作用于DLBCL細(xì)胞株后呈現(xiàn)明顯的劑量、時間依賴性，且ABC亞型較GCB亞型凋亡明顯（P＜0.01）。相同濃度HHT作用于MCF-7、SGC-7901細(xì)胞株未見明顯凋亡作用。作用于K562細(xì)胞48h凋亡率為46.0767±

6、3.7792，Kasumi-1細(xì)胞24H、48H后凋亡率分別為59.4867±1.4009、74.0567±3.88472。
　　2、濃度為40ng/mlHHT作用兩種細(xì)胞株24h后細(xì)胞均出現(xiàn)明顯形態(tài)改變，細(xì)胞明顯縮小，細(xì)胞核固縮，胞漿內(nèi)近膜處有空泡，凋亡小體明顯增加。
　　3、濃度為20ng/mlHHT作用于DLBCL細(xì)胞株不同時間后G0/G1期峰前均出現(xiàn)亞二倍體凋亡峰，24h、48h時表現(xiàn)為明顯的G0/G1期阻滯。

7、>　　4、隨著作用時間的延長DLBCL細(xì)胞株CD138、IgM、IgD陽性率逐漸增加，HHT作用兩種細(xì)胞株12h、24h、48h后CD138、IgM的陽性表達(dá)與空白對照組比較差異顯著(P＜0.01)。
　　5、隨著HHT作用時間的延長，端粒酶活性逐漸減弱，特別是在HHT作用48h時，ABC亞型端粒酶活性明顯喪失，相較于GCB型抑制明顯。
　　結(jié)論
　　1、HHT對DLBCL細(xì)胞株具有明顯的促凋亡作用，呈時間、劑量依賴性