核糖核酸酶抑制因子的抗體制備與純化及ELISA法對其藥代動力學的研究.pdf

1、腫瘤是威脅人類健康的主要疾病之一.傳統(tǒng)的化療藥物主要從直接殺傷腫瘤細胞入手,同時對正常細胞亦有毒副作用.核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)抑制腫瘤的作用則是通過與血管生成因子(Angiogenin,Ang)緊密結(jié)合,抑制腫瘤血管的生成,阻斷腫瘤細胞的氧氣及營養(yǎng)供應(yīng),從而使腫瘤細胞停止生長,而對正常細胞卻無毒副作用.該實驗室已報告RI具有良好的治療多種腫瘤療效;該研究在已有的基礎(chǔ)上成功制備了RI抗體并

2、進行純化,應(yīng)用ELISA法對RI的藥代動力學進行了初步探索.該文對實驗條件進行篩選優(yōu)化,確定了上樣量為2ml,洗脫液梯度濃度最高為30﹪,經(jīng)吸光度及蛋白含量測定確定組分收集為9~16管(1ml/管).純化后的抗體IgG進行SDS-PAGE,在約550kD處有單一條帶,經(jīng)Western-blot檢測有特異性條帶出現(xiàn)(約50kD處),說明純化效果較好.ELISA法測其效價,滴度達64,000以上,活性保持得很好,其穩(wěn)定性可達12個月以上.實

3、驗中采用間接ELISA法測抗原,建立了標準曲線,并對測定條件進行優(yōu)化,確定了一抗稀釋度為1:4000,二抗稀釋度為1:2000,BSA封閉液濃度為2﹪.同時對其方法學進行考證,靈敏度可達0.05μg/ml,批內(nèi)變異系數(shù)為9.28﹪,批間變異系數(shù)為13.56﹪,一抗稀釋4000倍后,穩(wěn)定性可達6個月以上.RI作為抗腫瘤藥物其藥代動力學研究未見報道,該文對ELISA法進行了初步探討,為以后的測定方法提供了一定的實驗基礎(chǔ),進而為RI的藥代動力