姜黃素對神經(jīng)元鐵超載的神經(jīng)保護機制.pdf

1、第一部分
　　目的：觀察各級紅細(xì)胞降解產(chǎn)物對神經(jīng)元的毒性作用及姜黃素神經(jīng)保護作用。
　　方法：培養(yǎng)小鼠原代皮層神經(jīng)元，以CCK-8檢測評估細(xì)胞存活量，檢測紅細(xì)胞、破碎紅細(xì)胞、血紅蛋白和FeCl2對神經(jīng)元的毒性作用，并以姜黃素干預(yù)觀察其神經(jīng)保護作用。
　　結(jié)果：各濃度梯度的紅細(xì)胞、破碎紅細(xì)胞對神經(jīng)元無明顯毒性損傷(p＞0.05)，100μM以上的血紅蛋白，50μM以上FeCl2對神經(jīng)元有毒性損傷(p＜0.05)，姜黃素濃

2、度依賴地減輕FeCl2對神經(jīng)元的毒性損傷(p＜0.05)。
　　結(jié)論：紅細(xì)胞降解產(chǎn)物中紅細(xì)胞、破碎紅細(xì)胞、血紅蛋白以及亞鐵離子對神經(jīng)元的毒性作用是逐漸增大的，降解過程中產(chǎn)物越分解，細(xì)胞毒性越大。姜黃素具有神經(jīng)保護作用。
　　第二部分
　　目的：觀察神經(jīng)元鐵超載后胞內(nèi)可變鐵池的變化及姜黃素的干預(yù)作用。檢測神經(jīng)元鐵超載后過氧化氫酶mRNA表達(dá)變化及姜黃素干預(yù)作用。
　　方法：以calcein熒光法測定胞內(nèi)可變鐵池，檢

3、測FeCl2作用神經(jīng)元后胞內(nèi)可變鐵池變化，以及姜黃素干預(yù)對可變鐵池的影響。RealtimePCR法檢測FeCl2作用神經(jīng)元后mRNA表達(dá)變化，以及姜黃素干預(yù)對mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：FeCl2呈濃度依賴地增高神經(jīng)元可變鐵池(p＜0.05)，姜黃素濃度依賴地降低神經(jīng)元鐵超載后可變鐵池(p＜0.05)。FeCl2呈濃度依賴地增高神經(jīng)元過氧化氫酶mRNA表達(dá)水平(p＜0.05)，姜黃素濃度依賴地降低過氧化氫酶mRNA表達(dá)水平(p

4、＜0.05)。
　　結(jié)論：姜黃素可螯合神經(jīng)元鐵超載后胞內(nèi)可變鐵池，并減弱鐵超載導(dǎo)致神經(jīng)元過氧化氫酶mRNA表達(dá)的增高，后者可能是間接作用。
　　第三部分
　　目的：觀察神經(jīng)元鐵超載后細(xì)胞凋亡和壞死樣凋亡的情況，以及姜黃素干預(yù)的影響。檢測姜黃素對壞死樣凋亡關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白RIP1的作用。
　　方法：以CCK-8和LDH檢測法評估細(xì)胞存活量，特異性抑制劑zvad和nec-1分別抑制凋亡和壞死樣凋亡，觀察各濃度梯度FeCl

5、2作用后凋亡和壞死樣凋亡的發(fā)生。WesternBlot和免疫熒光法檢測鐵超載后及姜黃素干預(yù)對神經(jīng)元RIP1蛋白水平的影響。
　　結(jié)果：凋亡和壞死樣凋亡發(fā)生高峰在100～200μMFeCl2，姜黃素呈濃度依賴地降低神經(jīng)元鐵超載后凋亡(p＜0.05)和壞死樣凋亡(p＜0.05)的發(fā)生。姜黃素呈濃度依賴(p＜0.05)和時間依賴(p＜0.05)地降低神經(jīng)元鐵超載后RIP1蛋白水平。
　　結(jié)論：姜黃素可抑制神經(jīng)元鐵超載后凋亡和壞死樣