p16基因上游序列與急性白血病細(xì)胞核基質(zhì)蛋白結(jié)合的實驗研究.pdf

1、鄭碩士論文題目：作者姓名：學(xué)科門類：專業(yè)名稱：導(dǎo)師姓名、職稱：學(xué)位授予單位代碼：學(xué)號或申請?zhí)枺好芗墸禾肑論文p16基因上游序列與急性白血病細(xì)胞核基質(zhì)蛋白結(jié)合的實驗研究馬鴻雁醫(yī)學(xué)血液內(nèi)科孫玲教授二零零五年五月控作用的相關(guān)性分析目前尚未見報道。本研究采用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)技術(shù)分析核基質(zhì)蛋白在急性白血病細(xì)胞中的改變：采用DNA蛋白質(zhì)雜交(Souchwestemblot)技術(shù)探討p16基因上游序列869bp中是

2、否含有核基質(zhì)結(jié)合元件，并分析p16基因上游序列在急性白血病細(xì)胞組與對照組內(nèi)與核基質(zhì)蛋白結(jié)合的情況。材料和方法p16promoter_lucpGL2Basic報告基因表達(dá)質(zhì)粒上用EcoRI和HindlII雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳回收890bp片段(包含p16基因外顯子1a上游869bp片段)，采用地高辛隨機引物法標(biāo)記探針，應(yīng)用DNA斑點雜交法檢測探針的靈敏度。12例急性白血病患者均未接受過放療和化療，其中急性粒細(xì)胞自血病部分分化型(M2)5

3、例，急性早幼粒細(xì)胞白血病(M3)1例，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)6例；HL60細(xì)胞由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院組胚教研室凍存復(fù)蘇傳代培養(yǎng)至109時收集；10例正常對照取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診非腫瘤、未經(jīng)化療及放療的發(fā)熱待查患者，骨髓象大致正常。經(jīng)蔗糖密度梯度離心得到細(xì)胞核后，低鹽、高鹽緩沖液提取核基質(zhì)蛋白。核基質(zhì)蛋白分為2份，一份經(jīng)SDSPAGE分析核基質(zhì)蛋白差異：另一份經(jīng)SDSPAGE后，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，標(biāo)記探針與之進(jìn)行Southw

4、esternblot。蛋白質(zhì)電泳條帶和雜交條帶采用Genetools軟件進(jìn)行分析，統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用fzS)表示，組間比較采用獨立樣本T檢驗，多個樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析，方差不齊時進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換，取n=O05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。結(jié)果1地高辛隨機引物法標(biāo)記的探針靈敏度達(dá)1口g／pl，符合實驗要求。2經(jīng)蔗糖密度梯度離心后得到的細(xì)胞核瑞氏染色光鏡下觀察可見細(xì)胞碎片較少，胞核輪廓清楚，胞漿洗脫較徹底，于400倍視野下計數(shù)200個細(xì)胞，其中無胞漿