低能離子注入黃曲霉甾體轉(zhuǎn)化株誘變選育色素突變體的研究.pdf

1、分類號： Q 3 叢密級：瘩微摩業(yè)大學(xué)學(xué)位論文低能離子注入黃曲霉甾體轉(zhuǎn)化株誘變選育色素突變體的研究S t u d i e so f B r e e d i n g P i g m e n t M u t a n t S t r a i no f t h eS t e r o i dH y d r o x y l a t i o n A s p e r g i l l u s p n v l l sb yL o w E n e r g y

2、 I o nI m p l a n t a t i o n研 究 生：一里壘! 皇指 導(dǎo) 教 師：合作指導(dǎo)教師：申請學(xué)位門類級別：專 、眥 名 稱：研 究 方 向：所 在 學(xué) 院：理備么 麴援基蒸塞 副麴握理堂亟±遺籃堂輻射當(dāng)坌王量佳堂生僉型堂堂隨答辯委員會主席2 0 0 6 年6 月A b s t r a c tI nt h em o d e m b i o m e ‘l i c a li n d u s t r y ，t

3、h e s t e r o i dh y d r o x y l a t i o n i so n e o f t h eh o t e s t a r e a so f b i o l o g i c a l t r a n s f o r m a t i o n ．I t h a s t r e m e n d o u s e c o n o m i c a n d s o c i a l b e n e f i t s ．I n

4、t h ei n d u s t r y ，t oo b t a i no x y g e na t o m ，i tu s u a l l yu s e h y d r o x y l a t i o ne n z y m ep r o d u c e db ys o m ec e r t a i n m i c r o —o r g a n i s m st oa d d a l p h a - o r b e t a —c o n

5、 f i g u r a t i o n h y d r o x y lt ot h e C 1 1o f s t e r o i d ，A s p e r g i l l u s f l a v u s i n v o l v e di nt h i ss t u d yi st h es t r a i nw h i c h h a s v e r ys t r o n gc a p a c i t yo f t h es t e

6、r o i dC n —a l p h ah y d r o x y l a t i o n ，b u tt h i s s t r a i n w i l l p r o d u c ear e dp i g m e n td u r i n gt h ef e r m e n t a t i o n ，w h i c hi sv e r yd i f f i c u l t t o r e m o v e w i t hc o n

7、v e n t i o n a lw a y s ，t h e r e b ya f f e c t i n gp r o d u c ts e p a r a t i o na n dp u r i f i c a t i o n ．T h i se x p e r i m e n tu s e sl o we n e r g yi o n t o m u t a t et h eo r i g i n a l s t r a i n

8、 A s p e r g i l l u sf l a v u s ，s t u d i e st h ep a r a m e t e r s o fi m p l a n t a t i o n ，h a s b r e d am u t a n ts t r a i nw h i c h h a s n o r e dp i g m e n t p r o d u c e dd u r i n g t h ef e r m e n

9、 t a t i o n a n d a n a l y s e d i t sg e n e t i cc h a r a c t e r i s t i c s ，u s e sR A P D t o a n a l y s et h ed i f f e r e n c eb e t w e e n t h e t w os t r a i n si nm o l e c u l a r l e v e l ，t h ef o l

10、 l o w i n gm a i n r e s u l t s w e r e ：1 ．A f t e rd e a l i n g w i t h l o w e n e r g y i o n ，t h eo r i g i n a ls t r a i ns h o w s a ”s a d d l e t y p e ”d o s e —s u r v i v a lc u r v e ；i nt h e S a l r l

11、 ei m p l a n t a t i o n e n e r g y a n d d o s e ，t h e g r e a t e r q u a l i t y ，t h el o w e rs u r v i v a lr a t e ；N + m u t a t i o n r a t ei sh i g h e r t h a n A r + ．T o A s p e r g i l l u s f l a v u s

12、 ，t h e b e s ti m p l a n t a t i o n i o ni sN + ，i m p l a n t a t i o n e n e r g yi sl O k e V a n d i m p l a n t a t i o n d o s ei s1 ．5 6 ×l0 1 5 i o n s ／c m 2 ~ 2 ．0 8 x 1 0 1 5 i o n s ／c m 2 ．2 ．T h r o

13、 u g ht w o r o u n d s c r e e n i n g ，o n e s t r a i nw h i c h h a s n o r e d p i g m e n t p r o d u c e d d u r i n gt h ef e r m e n t a t i o n w a sb r e d ．I t s a b s o r b e n c y i n 九= 3 9 5 n mi s n o t

14、i c e a b l y l o w e rt h a nt h eo r i g i n a l s t r a i n ．F u r t h e r e x p e r i m e n t s s h o w t h a t t h e m u t a n t s t r a i n h a s s t a b l e g e n e t i cc h a r a c t e r i s t i c s ．A t t h es a

15、 m e t i m e ，t h i nl a y e r c h r o m a t o g r a p h yt oe s t i m a t et h e t r a n s f o r m a t i o nr a t eo f t h es t e r o i di n d i c a t e s t h a tt h eh y d r o x y l a t i o n a b i l i t yo f t h em u

16、t a n ts t r a i nh a s n o tb e e no b v i o u s l y a f f e c t e d ．3 ．I no r d e r t o c o m p a r et h ed i f f e r e n c e sb e t w e e n t h es t a r t i n gs t r a i nm a d m u t a n t s t r a i ni nt h em o l e

17、c u l a r l e v e l ，w eu s e10 2r a n d o mp r i m e r s t od oR A P D a n a l y s i sa n d h a s f o u n d e i g h tr a n d o m p r i m e r s w h i c h h a v e d i f f e r ．e n t a m p l i f i c a t i o n s i n t w op

18、o o l s ，t h e f r e q u e n c yo fp o l y m o r p h i cp r i m e r si s7 ．8 5 ％．A f t e rc l o n i n gt h es e g m e n t sw h i c ha r ea m p l i f i e db y $ 9 6 、$ 3 8 2 、$ 3 8 8t o a n a l y s e t h e i r s e q u e n

19、 c e ，w e f i n d s o m e h o m o l o g o u s s e q u e n c e s w i t hA s p e r g i l l u s f u m i g a t u sA f 2 9 3 h y p o t h e t i c a lp r o t e i n ( A f u 6 9 0 2 3 4 0 ) 、A s p e r g i l l u s ^ m i g a t u sA

20、 f 2 9 3 3 - i s o p r o p y l m a l a t e d e h y d r a t a s e ( A f u 2 9 l 1 2 6 0 ) p a r t i a l m R N Aa n d A s p e r g i l l u sn i d u l a n sF G S C A 4 h y p o t h e t i c a lp r o t e i n ( A N 5 8 8 6 ．2 )