新型登革熱傳播媒介監(jiān)測(cè)誘蚊誘卵器開(kāi)發(fā)應(yīng)用研究.pdf

1、登革熱是由蚊蟲(chóng)傳播登革熱病毒引起的急性傳染病，隨著城市化和全球一體化的快速發(fā)展、過(guò)分依賴(lài)殺蟲(chóng)劑導(dǎo)致抗藥性等問(wèn)題20世紀(jì)80年代以來(lái)流行越來(lái)越嚴(yán)重，全球每年有百多萬(wàn)病例，近25億人口受到登革熱的威脅。我國(guó)自1978年廣東省再次爆發(fā)本病流行后，有不斷蔓延并向北移動(dòng)擴(kuò)散的趨勢(shì)。由于登革熱仍沒(méi)有特異性疫苗和治療藥物，所以加強(qiáng)登革熱及媒介監(jiān)測(cè)和控制仍是當(dāng)前最有效的預(yù)防措施，WHO特別強(qiáng)調(diào)加強(qiáng)新型敏感的媒介監(jiān)測(cè)方法的研究。本課題來(lái)源于廣東省疾病預(yù)防

2、控制中心的廣東省應(yīng)急病原檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室啟動(dòng)研究項(xiàng)目，屬?gòu)V東省重點(diǎn)科技項(xiàng)目(2003B60127)。 本研究目的是根據(jù)登革熱必須通過(guò)蚊蟲(chóng)的叮咬傳播和蚊蟲(chóng)吸血后產(chǎn)卵的特點(diǎn)，研究開(kāi)發(fā)對(duì)伊蚊特異性高的誘蚊誘卵器(Mosquitoandovipositiontrap，Mosq-ovitrap)，建立科學(xué)高效、簡(jiǎn)便可行的監(jiān)測(cè)方法，既監(jiān)測(cè)社區(qū)環(huán)境伊蚊密度，又采集社區(qū)環(huán)境中吸血后最可能帶毒的蚊蟲(chóng)，利用PCR和細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)對(duì)蚊蟲(chóng)進(jìn)行登革熱病毒的

3、帶毒監(jiān)測(cè)，建立簡(jiǎn)易、科學(xué)、可行的登革熱媒介的監(jiān)測(cè)體系，再結(jié)合登革熱疾病監(jiān)測(cè)，為建立登革熱可能流行的分級(jí)預(yù)警體系奠定基礎(chǔ)。 1.誘蚊誘卵器(Mosq-ovitrap)的設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)研究：根據(jù)白紋伊蚊喜歡趨向黑色、在陰涼潮濕的場(chǎng)所棲息活動(dòng)，吸血后需尋找容器清水型積水，并在潮濕粗糙表面上產(chǎn)卵的生態(tài)特點(diǎn)，參考美國(guó)開(kāi)發(fā)的誘卵杯，結(jié)合誘蠅籠的捕蠅原理，有針對(duì)性設(shè)計(jì)誘蚊誘卵器。 誘蚊誘卵器(Mosq-ovitrap)是指具有引誘伊蚊進(jìn)入產(chǎn)

4、卵并阻止其逃逸而捕獲蚊蟲(chóng)的器械。它由瓶體和瓶蓋組成。瓶體為圓柱型透明塑料瓶，直徑為70mm,高為100mm，瓶底向上突出一個(gè)橢圓圓錐型，其高為20mm，用于放置白色濾紙供伊蚊產(chǎn)卵，濾紙通過(guò)橢圓型下部凹槽的水保持濕潤(rùn)。瓶蓋為圓型黑色塑料，直徑為75mm，高為23mm，瓶蓋剛好與瓶身擰緊；瓶蓋上開(kāi)有三個(gè)向內(nèi)突出的倒圓錐管，上口徑為12mm，孔下口徑為7mm，管長(zhǎng)21mm。2004年已獲國(guó)家專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)：ZL03273724.6。 2

5、.實(shí)驗(yàn)室誘蚊誘卵研究：將50只吸血后2天的白紋伊蚊雌蚊放入試驗(yàn)玻璃房(1.8×1.8×1.8m3)，在玻璃房?jī)?nèi)兩個(gè)角落各平行配對(duì)布放誘蚊誘卵器及美國(guó)CDC誘卵杯、實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)卵杯、陶瓷容器和竹筒。連續(xù)布放4天，到第4天觀(guān)察計(jì)算誘到的蚊蟲(chóng)數(shù)，并將蚊蟲(chóng)捕捉后將蟲(chóng)卵數(shù)倒進(jìn)白搪瓷盆，在放大鏡下觀(guān)察計(jì)算蚊卵數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)4次，并依次輪換布放位置。新型誘蚊誘卵器的誘蚊誘卵指數(shù)(Mosquitoandovipositionpositiveindex，MOI

6、)和誘卵指數(shù)(Ovipositionindex，OI)為100，誘蚊誘卵器不但能誘卵，而且能捕獲產(chǎn)卵的成蚊，50只成蚊有近半數(shù)進(jìn)入誘蚊誘卵器內(nèi)，誘蚊密度指數(shù)(Mosquito-trapdensityindex,MDI)為12.25，蚊卵密度指數(shù)(Eggdensityindex，EDI)為1369.2個(gè)。 3.誘蚊誘卵器布放時(shí)間研究：于2004年9～11月選在廣州市某學(xué)校園區(qū)居民區(qū)、校園活動(dòng)場(chǎng)所綠化帶和花圃做為研究現(xiàn)場(chǎng)，按每25～

7、50m布放一個(gè)誘蚊誘卵器，每月上旬各布放70個(gè)，連續(xù)布放三個(gè)月。誘蚊誘卵器均布放在光線(xiàn)良好的花草樹(shù)陰下地面或陽(yáng)臺(tái)；放后第2、3、4、7天觀(guān)察誘卵器捕獲蚊蟲(chóng)(死、活)數(shù)，產(chǎn)卵陽(yáng)性數(shù)，記錄后放回原位置，第7天觀(guān)察后收集回實(shí)驗(yàn)室。 誘蚊誘卵器布放后第2、3、4、7天的誘蚊誘卵指數(shù)分別為23.4、38.5、50.3和72.8，隨著布放時(shí)間延長(zhǎng)誘蚊誘卵指數(shù)逐漸增高，但速率逐漸減慢。捕蚊總數(shù)、誘蚊密度指數(shù)和捕獲活蚊數(shù)也隨布放時(shí)間延長(zhǎng)而增加，

8、但活蚊比率卻逐漸減少，分別是83.3％、68.2％、58.0％和35.9％。 4.誘蚊誘卵器布放高度的研究：選在佛山市區(qū)一花木場(chǎng)做為研究現(xiàn)場(chǎng)，按每25～50m距離選擇有樹(shù)木或可在垂直方向的地面、離地面1m和1.5m高度的場(chǎng)所各布放一個(gè)誘蚊誘卵器，并均布放在花草樹(shù)陰下；隨后第4天觀(guān)察記錄誘卵器捕獲蚊蟲(chóng)數(shù)，產(chǎn)卵陽(yáng)性數(shù)。 誘蚊誘卵器布放在地面和同一垂直高度1m或1.5m時(shí)，誘蚊誘卵指數(shù)分別為19.30，9.26和4.63，地面

9、的誘蚊誘卵指數(shù)高于1m和1.5m高度的指數(shù)。 5.誘蚊誘卵器與誘蚊杯現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)效果的比較研究：從2004年8～11月和2005年2～8月，選擇在廣州的一個(gè)校園進(jìn)行研究，將準(zhǔn)備好的誘蚊誘卵器和誘卵杯布放在陰涼隱蔽的場(chǎng)所，擺放距離在1m左右，每月交替位置。在擺放第四天，檢查是否捕獲蚊蟲(chóng)或(和)產(chǎn)卵，并記錄捕獲的蚊蟲(chóng)數(shù)及種類(lèi)，再將其放回原來(lái)位置；第7天時(shí)再檢查誘蚊和誘卵的結(jié)果。 誘蚊誘卵器和誘卵杯布放4天時(shí)，陽(yáng)性指數(shù)分別是35.

10、5和56.7，布放7天時(shí)陽(yáng)性指數(shù)分別是53.3和71.5，誘卵杯布放7天時(shí)誘卵指數(shù)是布放4天時(shí)誘蚊誘卵指數(shù)的2倍。誘蚊誘卵器可以誘集成蚊，布放4天，回收662個(gè)誘蚊誘卵器，誘伊蚊密度指數(shù)為1.21±1.12，每個(gè)誘捕蚊蟲(chóng)為0～8只；布放4天共誘集284只白紋伊蚊，另外還有2只致乏庫(kù)蚊，白紋伊蚊占99.3％。 每月監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，布放4天的誘蚊誘卵指數(shù)與誘卵杯布放4天和7天的誘卵指數(shù)都存在正相關(guān)關(guān)系，r=0.845，P=0.001，

11、y=17.296+1.115x和r=0.838，P=0.001，y=25.548+1.312x。 應(yīng)用誘蚊誘卵器布放4天，誘蚊誘卵指數(shù)具有明顯的季節(jié)性變化。但應(yīng)用誘卵杯布放7天，誘卵陽(yáng)性指數(shù)從4月份至11月份都維持在很高的水平，季節(jié)變化不明顯。 6.誘蚊誘卵器與傳統(tǒng)幼蟲(chóng)指數(shù)監(jiān)測(cè)效果的比較研究：從2004年3月至2005年11月，選擇在廣東省佛山市和揭陽(yáng)市進(jìn)行研究，在選定的試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)，隨機(jī)從每5戶(hù)家庭中選擇1戶(hù)布放一個(gè)誘蚊誘

12、卵器，或在醫(yī)院、學(xué)校、機(jī)關(guān)事業(yè)單位和公園花圃的環(huán)境時(shí)，按每25-50m距離布放一個(gè)誘蚊誘卵器。在擺放誘蚊誘卵器后的第四天，用肉眼或10倍放大鏡檢查誘蚊誘卵器是否捕獲蚊蟲(chóng)及(或)產(chǎn)卵，并記錄和收集捕獲的蚊蟲(chóng)數(shù)及種類(lèi)。同時(shí)調(diào)查室內(nèi)及室外周?chē)姆e水容器和蚊蟲(chóng)孳生容器數(shù)，或以誘蚊誘卵器為中心，調(diào)查半徑5m以?xún)?nèi)周?chē)h(huán)境(按1戶(hù)單位計(jì)算)的容器積水?dāng)?shù)和蚊蟲(chóng)孳生容器數(shù)。 7.誘蚊誘卵器在登革熱暴發(fā)流行時(shí)媒介監(jiān)測(cè)應(yīng)用研究：2004年9月中山市爆

13、發(fā)登革熱流行時(shí)，按登革熱診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查搜索病例，應(yīng)用誘蚊誘卵器在疫區(qū)布放監(jiān)測(cè)蚊蟲(chóng)密度并誘集成蚊，同時(shí)調(diào)查疫點(diǎn)的布雷圖指數(shù)，應(yīng)用TaqManMGBReal-timePCR檢測(cè)誘集到的白紋伊蚊體內(nèi)登革病毒。 2004年9月24日確認(rèn)ZZ社區(qū)登革熱暴發(fā)流行后，發(fā)現(xiàn)布雷圖指數(shù)為65.2，通過(guò)啟動(dòng)應(yīng)急滅蚊等登革熱綜合控制措施，成蚊密度即誘蚊誘卵指數(shù)控制在4.5～10.3，布雷圖指數(shù)控制在4.7～6.1，本次流行在應(yīng)急控制后第

14、21天結(jié)束，共34例病人。 對(duì)疫區(qū)社區(qū)捕獲的18只和非疫區(qū)社區(qū)捕獲的87只白紋伊蚊成蚊，分組研磨，提取RNA后進(jìn)行二步法TaqManMGBReal-timePCR，均未發(fā)現(xiàn)登革熱病毒RNA，而人工感染登革病毒的2只蚊蟲(chóng)則檢測(cè)陽(yáng)性。 結(jié)論： 誘蚊誘卵器(Mosq-Ovitrap)是指具有引誘伊蚊進(jìn)入產(chǎn)卵并阻止其逃逸而捕獲蚊蟲(chóng)的器械?，F(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用誘蚊誘卵器監(jiān)測(cè)白紋伊蚊，布放最佳位置是在是社區(qū)環(huán)境的樹(shù)蔭、花盆、綠化帶花草木

15、下的地面上，每25～50m布放1個(gè)，布放時(shí)間4天。 誘蚊誘卵法直接通過(guò)誘蚊誘卵指數(shù)、誘蚊密度指數(shù)，定量分析監(jiān)測(cè)區(qū)域蚊蟲(chóng)密度，敏感地反映實(shí)際成蚊密度的變化和季節(jié)消長(zhǎng)，而且可直觀(guān)鑒別捕獲的蚊蟲(chóng)種類(lèi)，具有快速、直觀(guān)、可定量分析的特點(diǎn)，同時(shí)可以捕獲蚊蟲(chóng)進(jìn)行病毒檢測(cè)。誘蚊誘卵指數(shù)與目前國(guó)際通用的誘卵杯誘卵指數(shù)存在正相關(guān)關(guān)系，與傳統(tǒng)布雷圖指數(shù)和房屋指數(shù)也存在正相關(guān)關(guān)系，特別是與布雷圖指數(shù)結(jié)果相接近。 當(dāng)?shù)歉餆岜┌l(fā)流行時(shí)，誘蚊誘卵法可