白色念珠菌細(xì)胞壁缺陷株與藥物敏感株篩選方法的初步建立.pdf

1、近20年來，真菌感染尤其是深部真菌感染的頻率和嚴(yán)重性急劇增加，尋找治療深部真菌感染的藥物十分迫切，而現(xiàn)有藥物由于其毒性和副作用使得其應(yīng)用受到極大的限制。本論文以最重要的致病真菌之一白色念珠菌為模型，高通量篩選白色念珠菌細(xì)胞壁缺陷及藥物敏感的突變株，以期為研究新型的高效低毒的抗真菌藥物打下基礎(chǔ)。 本研究首先采用反義RNA技術(shù)，將白色念珠菌反義cDNA文庫轉(zhuǎn)化白色念珠菌缺陷型菌株CAI-4(△ura3::imm434/△ura3::

2、imm434)，在無脲嘧啶的YNB培養(yǎng)基上篩選出大量基因表達(dá)降低或沉默突變體，通過優(yōu)化轉(zhuǎn)化條件，使轉(zhuǎn)化效率達(dá)到了170個/μg質(zhì)粒。然后進(jìn)一步采用幾丁質(zhì)結(jié)合染料Calconuor white(CFW)作為篩選因子獲得一批細(xì)胞壁合成缺陷的突變菌株，在隨機(jī)選取的200個沉默突變體中，獲得了50個CFW超敏感的突變菌株。將分離獲得的細(xì)胞壁缺陷突變株進(jìn)行離體藥物敏感性分析，在此選用了美國臨床標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦的M27-A方案，以ATCC90028