FCGR3B基因拷貝數(shù)變異與河南漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、引言:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種嚴(yán)重的自身免疫性疾病，常累及多個(gè)器官，以B細(xì)胞過(guò)度活化和抗原抗體免疫復(fù)合物形成為特點(diǎn)。好發(fā)于育齡期婦女，發(fā)病高峰年齡為15-40歲，男女的患病率之比約為1∶9。系統(tǒng)性紅斑狼瘡病程以復(fù)發(fā)和緩解交替為特點(diǎn)，多需要終生治療，對(duì)社會(huì)、患者家庭都造成了很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神心理壓力，嚴(yán)重危害著人類的健康。對(duì)于其發(fā)病機(jī)制的研究從未停歇過(guò)，但目前尚未完全闡明。隨著全基因組研究技術(shù)的開(kāi)展和其他基因變異的發(fā)現(xiàn)，目前對(duì)S

2、LE的發(fā)病機(jī)制有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。越來(lái)越多的證據(jù)表明遺傳因素在SLE發(fā)病中起主要作用[1-3]，環(huán)境因素、感染因素及雌激素等因素可能只是SLE發(fā)病的誘發(fā)因素。
　　在過(guò)去十年，人類全基因組相關(guān)性研究(Genome-wideassociationstudies,GWAS)發(fā)現(xiàn)了許多與人類疾病相關(guān)的SNPs，但是目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的SNPs僅能解釋一小部分常見(jiàn)疾病的遺傳因素，目前對(duì)于那些無(wú)法解釋的遺傳原因有很多相關(guān)推測(cè)。染色體的重組能導(dǎo)致一

3、些特殊的疾病和癥狀[4],最近的一些報(bào)道提示基因拷貝數(shù)變異在一些疾病的易感性中有一定作用。如Borozdin等人發(fā)現(xiàn)的低CCL3L1基因拷貝數(shù)是HIV感染的易感因素[5]，Hollox等人的研究認(rèn)為高的DEFB基因拷貝數(shù)是銀屑病很強(qiáng)的易感因素[6]，另外一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)低HBD-2基因拷貝數(shù)是潰瘍性結(jié)腸炎的危險(xiǎn)因素[7]?？截悢?shù)變異(Copynumbervariation，CNV)被定義為一個(gè)DNA片段大小范圍從1kb到3Mb的亞微觀突變，

4、是一可能具有致病性、良性或未知臨床意義的基因組改變。
　　關(guān)于基因拷貝數(shù)變異在SLE中的研究，目前已發(fā)現(xiàn)了許多與SLE發(fā)病相關(guān)的基因。這對(duì)進(jìn)一步解釋SLE的發(fā)病機(jī)制意義重大。CCL3L1、FCGR3B、Toll樣受體7、組胺H4受體、補(bǔ)體C4等基因拷貝數(shù)變異被認(rèn)為可能與SLE發(fā)病相關(guān)[8-12]，但目前此方面的證據(jù)并不十分充足，研究結(jié)論也爭(zhēng)議較大。因此，為進(jìn)一步確認(rèn)FCGR3B基因拷貝數(shù)變異是否和河南漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡及狼瘡腎炎發(fā)

5、病相關(guān)，本研究收集了329例河南漢族SLE患者和328例健康對(duì)照者臨床、實(shí)驗(yàn)室資料及血標(biāo)本，檢測(cè)其FCGR3B基因拷貝數(shù)，并分析FCGR3B基因拷貝數(shù)變異對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡及狼瘡腎炎疾病的影響及與系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床表型的相關(guān)性。
　　目的:
　　1.了解FCGR3B基因拷貝數(shù)在河南漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡及正常人群分布情況。
　　2.探討FCGR3B基因拷貝數(shù)變異與河南漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡和狼瘡腎炎易感性的關(guān)系及其與臨床表型是否

6、存在相關(guān)性。
　　方法:
　　1.收集2010-2012年間就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎病風(fēng)濕科的SLE患者329例，健康對(duì)照者為來(lái)自鄭州大學(xué)學(xué)生志愿者和鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢科的健康志愿者，共328例。收集所有患者的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果及其病理類型。采集患者和健康對(duì)照者血標(biāo)本。應(yīng)用GentraPuregeneBloodKit提取患者及健康對(duì)照者DNA，置于-80℃冰箱保存。
　　2.應(yīng)用改良的競(jìng)爭(zhēng)性PCR方

7、法AccuCopyTM多重基因拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)患者和健康對(duì)照者FCGR3B基因拷貝數(shù)。SLE患者按有無(wú)腎臟損害、病理類型、疾病活動(dòng)度、性別進(jìn)行分組，然后分析組間拷貝數(shù)分布有無(wú)差異。再分析FCGR3B基因拷貝數(shù)對(duì)疾病易感性的影響及和臨床表型的關(guān)系。
　　3.應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩樣本間定量資料的比較用t檢驗(yàn)或Mann-whitneyU檢驗(yàn)。FCGR3B基因拷貝數(shù)與患者臨床表型間的相關(guān)性分析用x2檢驗(yàn)。Logist

8、ic回歸分析法分析FCGR3B基因拷貝數(shù)與SLE或LN的疾病易感性的關(guān)系，并計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)比(OR)和95％可信區(qū)間。P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.FCGR3B基因拷貝數(shù)在河南漢族SLE患者和健康對(duì)照者中的分布:SLE患者和健康對(duì)照者FCGR3B拷貝數(shù)為1-4不等，平均拷貝數(shù)均為2拷貝。兩組間拷貝數(shù)分布無(wú)差異(P=0.434)。分別按性別、有無(wú)腎臟損害、SLEDAI進(jìn)行分層，結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)分布有差異

9、(P＞0.05)。
　　2.LN患者中FCGR3B基因拷貝數(shù)分布情況:本研究中共有LN患者142例，另外分析了LN患者和健康對(duì)照者拷貝數(shù)分布情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組間分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。分別根據(jù)LN患者腎臟病理類型、AI、CI分組，同樣未發(fā)現(xiàn)兩組之間FCGR3B基因拷貝數(shù)分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3.FCGR3B基因拷貝數(shù)變異對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡風(fēng)險(xiǎn)分析:以平均拷貝數(shù)2為界，把SLE患者分為低拷貝數(shù)組(

10、＜2)和高拷貝數(shù)組(＞2)。Logistic回歸分析法分析FCGR3B拷貝數(shù)對(duì)SLE疾病的風(fēng)險(xiǎn)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高FCGR3B基因拷貝數(shù)組(OR=0.900;95％CI:0.622-1.302;P=0.576)和低FCGR3B基因拷貝數(shù)組(OR=1.321;95％CI:0.781-2.234;P=0.298)對(duì)SLE易感性均無(wú)影響。
　　4.FCGR3B基因拷貝數(shù)變異對(duì)狼瘡腎炎風(fēng)險(xiǎn)分析:同樣的方法把LN患者分為低拷貝數(shù)組(＜2)和高拷貝

11、數(shù)組(＞2)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高拷貝數(shù)與LN的疾病易感性不相關(guān)(OR=1.119;95％CI:0.700-1.789;P=0.638)，而低拷貝數(shù)是LN患者的風(fēng)險(xiǎn)因素（OR=1.919;95％CI:1.034-3.560;P=0.039）。
　　5.FCGR3B基因拷貝數(shù)變異與臨床表型的相關(guān)性:x2檢驗(yàn)分析FCGR3B基因拷貝數(shù)變異與SLE臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查和免疫學(xué)指標(biāo)間的關(guān)系，結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1.河