大蒜油拮抗荷瘤小鼠化放療致白細(xì)胞減少的作用研究.pdf

1、目的：
　　 目前，化學(xué)治療（Chemotherapy）和放射治療(Radiotherapy)是腫瘤治療的兩種主要手段。但其選擇性差，在取得治療效果的同時，常出現(xiàn)不同程度的毒副作用，即殺死癌細(xì)胞同時，對正常細(xì)胞也產(chǎn)生很大的影響。在各種副作用中，骨髓抑制導(dǎo)致的白細(xì)胞較少癥(Leukopenia)，既是最常見又是最嚴(yán)重的副作用之一。在尚未發(fā)現(xiàn)有效治愈手段前提下，利用植物藥或植物活性提取物，輔助化療或放療，降低其毒副作用，特別是骨髓抑

2、制導(dǎo)致的白細(xì)胞減少，免疫力降低等并發(fā)癥，提高生活質(zhì)量，是腫瘤治療的一個熱點課題。大蒜油(Garlicoil，GO)是從百合科蔥屬植物大蒜中提取的一種與水不相混溶的油狀多組分揮發(fā)性混合物，含有烯丙基硫化物和水溶性半胱氨酸等多類有效成分。流行病學(xué)調(diào)查和實驗研究均已證實GO有抗氧化損傷的作用，本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)大蒜油能顯著減輕輻射導(dǎo)致的白細(xì)胞減少癥。而化療和放療中最主要的副作用是導(dǎo)致白細(xì)胞數(shù)量降低，進(jìn)而導(dǎo)致患者免疫力低下，從而限制了其應(yīng)用。

3、因此，本研究以小鼠肝癌細(xì)胞H22建立荷瘤小鼠模型，分別以廣譜高效的環(huán)磷酰胺(CP)治療荷瘤小鼠作為化療模型，和以臨床常用的醫(yī)用X射線照射荷瘤小鼠作為放療模型，觀察GO是否對化療放療所致白細(xì)胞減少癥等毒副作用起拮抗作用。
　　 方法：
　　 1．荷瘤小鼠模型建立及分組
　　 選擇H22癌細(xì)胞株接種后6-8天的種鼠，抽取約3ml腹水（乳白色），放入無菌容器內(nèi)，加無菌生理鹽水洗滌后，以1000r/min離心5min（離

4、心半徑10cm），棄上清，洗兩次后，收集癌細(xì)胞。用無菌生理鹽水制備成2×107cells/ml的細(xì)胞懸液，備用。用酒精消毒接部位的皮膚，每只小鼠于左腋窩皮下接種癌細(xì)胞懸液(2×107cells/ml)0.2ml，整個操作應(yīng)在30min內(nèi)完畢。24小時后，將動物隨機(jī)分組。
　　 第一部分實驗分組60只荷瘤小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分成荷瘤模型組(Model組)、CP組、25mg/kgGO+CP組（GO1+CP組）和50mg/kgGO+CP組

5、(GO2+CP組)，每組15只。隔一天開始給藥，CP組腹腔注射CP50mg/kgbw，GO1+CP組和GO2+CP組，在給予CP的同時，分別用25mg/kgbw和50mg/kgbw大蒜油灌胃，Model組和CP組用等體積玉米油灌胃，連續(xù)14d。
　　 第二部分實驗分組60只荷瘤小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分成荷瘤模型組、放療組、低劑量GO組(25mg/kg)、中劑量GO組(50mg/kg)和高劑量GO組（100mg/kg），每組12只。隔一

6、天開始給藥，放療組、低劑量GO組、中劑量GO組和高劑量GO組給予500Rad劑量的一次性X射線全身照射。低劑量GO組、中劑量GO組和高劑量GO組，在給予X射線照射的同時，分別用25mg/kg、50mg/kg和100mg/kgGO灌胃，模型組和放療組用等體積玉米油灌胃，連續(xù)14d。
　　 2．實驗指標(biāo)
　　 于第14天，將各組小鼠摘眼球取血后處死，剝?nèi)⊥暾鰤K后稱重，計算抑瘤率。同時測外周血紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)和血小板計

7、數(shù)。取脾臟稱重，計算脾臟指數(shù)，同時進(jìn)行病理切片，觀察組織病理和脾結(jié)節(jié)計數(shù)。取骨髓進(jìn)行骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、骨髓DNA含量、骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率。
　　 統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS17.0對多組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析；各實驗組與對照組兩兩比較采用Dunnett檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1．GO拮抗荷瘤小鼠化療致白細(xì)胞減少的作用研究
　　 1.1.對化療荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響

8、
　　 實驗結(jié)束時，Model組體質(zhì)量有不同程度的增加，CP組體質(zhì)量明顯下降。大蒜油治療組體質(zhì)量減輕不明顯，但與CP組無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2.2.GO對化療荷瘤小鼠瘤重及抑瘤率的影響
　　 與Model組瘤重相比，CP組能顯著抑制腫瘤生長，抑瘤率達(dá)60.5％(P＜0.05)。25mg/kgGO組和50mg/kgGO組抑瘤率分別達(dá)58.1％、62.0％，與CP組無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。

9、>　　 2.3.GO對化療荷瘤小鼠外周血象的影響
　　 CP對RBC和PLT影響較小，但明顯降低外周WBC，由Model組8.73±1.48×109/L降低到2.98±0.86×109/L(P＜0.05)。50mg/kgGO組WBC都有一定程度升高，為7.27±1.39×109/L(P＜0.05)，而對RBC和PLT無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。2.4.GO對化療荷瘤小鼠脾臟指數(shù)、脾結(jié)節(jié)計數(shù)及脾病理學(xué)變化
　　 與Mo

10、del組比較，CP組脾臟絕對重量和脾臟指數(shù)明顯降低，分別為55.2％，34.8％(P＜0.05)。與CP組比較，50mg/kgGO組脾臟指數(shù)顯著增加了60.0％（P＜0.05）。脾結(jié)節(jié)計數(shù)亦顯著增加了161.3％(P＜0.05)。
　　 2.5.GO對化療荷瘤小鼠骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、骨髓DNA含量和骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響
　　 與Model組相比，CP組骨髓有核細(xì)胞計數(shù)減少了64.3％(P＜0.05)。骨髓DNA含量

11、降低了50.1％(P＜0.05)，骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率由3.5‰增加到40.2‰（P＜0.05）。GO顯著升高骨髓有核細(xì)胞計數(shù)和骨髓DNA含量，比CP組增加了74.0％，39.7％(P＜0.05)，并且微核率顯著降低（P＜0.05）。
　　 2．GO拮抗荷瘤小鼠放療白細(xì)胞減少的作用研究
　　 2.1.GO對放療荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響
　　 實驗結(jié)束時，模型組體質(zhì)量有不同程度的增加，放療組、低劑量GO組、中劑量GO

12、組體質(zhì)量明顯下降。高劑量GO組體質(zhì)量減輕不明顯，但與放療組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 2.2.GO對放療荷瘤小鼠瘤重及抑瘤率的影響
　　 與模型組瘤重相比，放療組能顯著抑制腫瘤生長，抑瘤率達(dá)68.7％（P＜0.05）。25mg/kg、50mg/kg、100mg/kgGO組抑瘤率分別達(dá)69.0％、70.2％、67.8％，與放療組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 2.3.GO對放療荷瘤小鼠外周血象的

13、影響
　　 放療組對RBC和PLT影響較小，但明顯降低外周WBC，與模型組相比，降低了75.0％(P＜0.05)。50mg/kgGO組和100mg/kgGOGO組WBC都有一定程度升高，分別為4.66±1.29×109/L，6.25±0.90×109/L(P＜0.05)，而對RBC和PLT無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 2.4.GO對放療荷瘤小鼠脾臟指數(shù)和脾結(jié)節(jié)計數(shù)的影響及脾病理
　　 與模型組比較，放療組

14、脾臟絕對重量和脾臟指數(shù)明顯降低，分別為80.4％，72.7％(P＜0.05)。與放療組比較，低、中、高GO組脾臟指數(shù)顯著增加(P＜0.05，vs放療組)，分別為0.22±0.07、0.30±0.07、0.38±0.05，脾結(jié)節(jié)計數(shù)亦顯著增加（P＜0.05，vs放療組），分別為：13.5±2.8，17.8±2.5，21.3±3.0。2.5.GO對放療荷瘤小鼠骨髓DNA含量和骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響
　　 與模型組相比，骨髓DN

15、A含量降低了78.8％(P＜0.05)，骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率由5.1‰增加到50.6‰（P＜0.05）。50mg/kgGO、100mg/kgGO組顯著升高骨髓DNA含量，分別比放療組增加了47.4％，82.9％(P＜0.05)。中、高GO劑量組微核率降低（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1．大蒜油可以拮抗環(huán)磷酰胺化療和X射線放療所致的白細(xì)胞減少副作用，同時不影響其抑瘤效果。
　　 2．大蒜油可以降低環(huán)磷酰