甲硝唑在豬、雞和大鼠體內(nèi)的代謝及殘留消除研究.pdf

1、甲硝唑(Me tro nidazo le，MN Z)是一種人工合成的硝基咪唑類抗菌藥物，主要用于治療由專性厭氧菌、原蟲和螺旋體感染引起的疾病，如阿米巴原蟲感染引起的禽類黑頭病和豬蛇形螺旋體感染引起的痢疾。它具有抗菌效果好、安全性高、經(jīng)濟實惠等優(yōu)點，曾廣泛應用于獸醫(yī)臨床和畜牧養(yǎng)殖業(yè)中。但是相關毒理學研究顯示其具有潛在致癌性和致突變性，為了保障食品安全，許多國家都禁止其以抗應激、促進生長等目的用于食品性動物上，僅允許用作治療藥物，但在動物源

2、性食品中不得檢出。然而甲硝唑在實際生產(chǎn)中仍存在違規(guī)使用和濫用現(xiàn)象，導致其在動物體內(nèi)的殘留超標，食品動物組織中的殘留嚴重影響食品安全監(jiān)測和人類的健康。目前，關于甲硝唑在豬、雞等食品動物體內(nèi)的處置研究還有很多問題仍未解決，在食品動物上的代謝還不是很清楚，靶動物上的殘留靶組織和殘留標示物也還沒確定，甲硝唑在食品動物體內(nèi)的安全性應用還存在比較大的爭議。因此，本試驗通過開展甲硝唑在豬、雞和大鼠體內(nèi)的代謝及組織殘留消除規(guī)律研究，采用 LC/MS-I

3、T-TOF與LC-MS/MS聯(lián)用技術，LC/MS-IT-TOF對代謝物進行定性分析，用LC-MS/MS比對標準品對組織中的代謝物進行定量分析，研究甲硝唑在豬、雞和大鼠體內(nèi)的代謝和殘留消除規(guī)律，推測其在動物體內(nèi)可能的代謝途徑，研究其在動物組織的殘留情況，確立殘留靶組織和殘留標示物，為甲硝唑在食品動物上的殘留監(jiān)控提供明確的監(jiān)控對象，為其殘留標準的制定提供理論依據(jù)和技術支持。
　　1甲硝唑在豬、雞和大鼠體內(nèi)代謝與排泄
　　豬4頭，

4、雞6只，大鼠6只，按25mg/kg bw單次灌服甲硝唑。分別在給藥后第6h、12 h、24h收集尿液和糞便，以后每隔24 h收集一次尿液和糞便，并在前5個時間點采集血漿。尿液采用酶解和不酶解兩種方法處理，采用LC/MS-IT-TOF定性分析代謝產(chǎn)物，LC-MS/MS定量主要代謝物，研究甲硝唑在動物體內(nèi)的代謝。結(jié)果顯示，給藥1d后排出的藥物量占給藥量的75.5％~76.5%；給藥14d后，豬排泄物中排出的藥物量占給藥量回收率為85.8%、

5、雞排泄物中回收率為86.4%、大鼠排泄物中回收率為86.6%，平均回收率在85%以上。大鼠和豬尿排泄率分別為65.2%和75.2%，糞排泄率均為10.6%~21.4%。由此可知，甲硝唑在豬、雞和大鼠體內(nèi)吸收迅速，排泄較快，主要隨尿液排出體外。豬、雞和大鼠體內(nèi)分別檢測到6、4和4種代謝產(chǎn)物，其中豬體內(nèi)檢測到出MNZ、HM、MAA、MOOH、Glu-MNZ和Sul-MNZ，雞體內(nèi)檢測到MNZ、HM、MAA和MOOH，大鼠體內(nèi)檢測到MNZ、H

6、M、MAA和Glu-MNZ。根據(jù)甲硝唑在三種動物體內(nèi)代謝情況，推測甲硝唑的代謝特點主要為：一是發(fā)生側(cè)鏈羥基化；二是羥基化側(cè)鏈的氧化，包括1位醇羥基氧化成羧基和2-位羥甲基的氧化；三是甲硝唑與葡萄糖醛酸結(jié)合或甲硝唑與硫酸結(jié)合的形式。
　　2甲硝唑在豬和雞體內(nèi)的殘留消除研究
　　健康三元雜交豬24頭和科寶肉雞36羽，分6組，分別按25mg/k g b w灌服甲硝唑，連續(xù)灌服7天。于停藥后6h、1d、3d、5d、7d和14d分別宰

7、殺一組動物，取肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、心臟、肺臟、胃、大腸和小腸等，勻漿后樣品經(jīng)提取、凈化后，用LC-MS/MS檢測對代謝物進行定量分析。
　　甲硝唑在豬體內(nèi)的研究結(jié)果顯示，豬肝臟和腎臟中甲硝唑濃度在酶解前后有顯著差異，其他組織無明顯差別。停藥6h后，豬9種組織中都能檢測到 MNZ、HM和MAA三種代謝產(chǎn)物，其中MN Z在肺和胃中濃度最高，HM在腎臟和肌肉中濃度最高；停藥1d后，脂肪、胃、大腸和小腸中能檢測到MN Z和HM，肝臟、

8、腎臟、肌肉、心臟和肺中能檢測出MNZ、HM和少量的MAA；停藥3d后，肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、肺和小腸中能夠檢測到MNZ和HM，心、胃和大腸中僅能檢測到MNZ， MAA已經(jīng)降低到檢測限以下；停藥5d和停藥7d后，所有組織中都只能檢測到MN Z；停藥14d后，僅肝臟和腎臟中能檢測到少量甲硝唑，濃度分別為2.14μg/k g和3.06μg/k g，接近檢測限，其他組織中均已檢測不到相關代謝產(chǎn)物，甲硝唑在豬肝臟、腎臟中消除較慢，消除半衰期分別

9、為3.01d，4.33 d。由此可知，甲硝唑原型是豬所有可食性組織中消除最慢的化合物，且其腎臟中的殘留時間最長，由此將甲硝唑原型確定為甲硝唑在豬體內(nèi)的殘留標示物，腎臟為殘留靶組織。
　　甲硝唑在雞體內(nèi)的研究結(jié)果顯示，停藥后6h，除了脂肪檢測不到羧基甲硝唑外，其他組織中都能檢測到MNZ、HM和MAA三種代謝產(chǎn)物，其中MNZ在胃中含量最高，HM在肌肉中含量最高；停藥1d后，肝臟、腎臟、肌肉、心、肺和胃中能檢測到MNZ、HM和MAA三種

10、代謝產(chǎn)物；大腸和小腸中只能到 MNZ和HM；停藥3d后，肝臟、腎臟、肌肉心、肺和胃中能檢測到MNZ、HM和MAA三種代謝產(chǎn)物，大腸和小腸中的MAA已經(jīng)降低到檢測限以下；停藥5d和停藥7d后，所有組織中都只能檢測到MNZ；停藥14d后，僅肝臟、腎臟和肌肉中能檢測到少量甲硝唑，濃度分別為2.18μg/k g、3.37μg/k g和1.36μg/k g，其他組織中均已檢測不到相關代謝產(chǎn)物，甲硝唑在雞肝臟、腎臟和肌肉中消除較慢，消除半衰期分別為

11、3.15d，3.47 d，2.48d。由此可知，甲硝唑原型是雞所有可食性組織中消除最慢的化合物，且其在腎臟中的殘留時間最長，由此將甲硝唑原型確定為甲硝唑在雞體內(nèi)的殘留標示物，腎臟為殘留靶組織。
　　綜上所述，本文首次開展了甲硝唑在豬、雞和大鼠等動物體內(nèi)代謝與組織殘留消除研究，建立了甲硝唑及其主要代謝物在豬和雞可食性組織中的殘留檢測方法。分離和鑒定了甲硝唑在豬、雞和大鼠尿液、糞便、血漿和膽汁中的代謝物，對可食性組織中的代謝物進行了定