不同方法制備富血小板纖維蛋白對(duì)脂肪干細(xì)胞體外增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：旨在通過不同離心速度及離心時(shí)間制備富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)，比較其內(nèi)所含生長(zhǎng)因子特別是血小板衍生生長(zhǎng)因子-AB（Platelet-derived growth factor，PDGF-AB）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（Transforming growth factor-beta1，TGF-β1）含量及其對(duì)脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)體外增

2、殖的情況，為將制備出優(yōu)良的PRF應(yīng)用于軟組織創(chuàng)面修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：取新西蘭大耳白兔腹股溝部脂肪組織，使用膠原酶消化法處理脂肪組織，培養(yǎng)原代脂肪干細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)及變化，通過血球計(jì)數(shù)板于倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖，收集第3代細(xì)胞進(jìn)行體外三系誘導(dǎo)分化，在誘導(dǎo)7天、14天、28天時(shí)間里，分別加入成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行油紅O染色、成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行VonKossa染色、成神經(jīng)誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)，鑒定A

3、DSCs多向分化潛能；取新西蘭大耳白兔自體靜脈血，分別以不同速度（2700r/min、3000r/min、3300r/min）、不同時(shí)間（10min、15min、20min）離心制備PRF，通過ELISA試劑盒對(duì)每個(gè)PRF在靜置7天、14天、21天時(shí)間里，釋放液中TGF-β1和PDGF含量進(jìn)行檢測(cè)，觀察各組生長(zhǎng)因子的濃度差異；CCK-8比色法檢測(cè)不同方法制備的PRF對(duì)ADSCs細(xì)胞體外增殖活性的影響。
　　結(jié)果：原代培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞

4、呈成纖維細(xì)胞樣貼壁生長(zhǎng)，具有很強(qiáng)的增殖能力，并成功向成神經(jīng)元細(xì)胞、骨組織細(xì)胞和脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化，即具有干細(xì)胞特性，因而所培養(yǎng)的細(xì)胞為脂肪來源干細(xì)胞（ADSCs）。同一靜置時(shí)間下，以2700r/min，15min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于10min組及20min組；以3000r/min，10min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于15 min組及20min組；且2700r/min

5、，15min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于3000r/min，10min組(P﹤0.05)；以3300r/min組的離心速度下，不同離心時(shí)間制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。CCK-8比色法檢測(cè)2700r/min，15min組制備的PRF對(duì)ADSCs增殖的OD值高于3000r/min及3300 r/min組(P<0.05)。
　　結(jié)論：來源于動(dòng)物脂肪吸收物