SIRT5對STAT3的乙?；{(diào)節(jié)及其功能的研究.pdf

1、STAT3是細(xì)胞因子和生長因子受體的胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子。當(dāng)細(xì)胞因子與JAK相連受體結(jié)合時,JAK通過自身磷酸化而被激活,激活后的JAK可磷酸化一個或多個受體位點并呈遞給STAT3結(jié)合,隨后STAT3發(fā)生Tyr705和Ser727位點的磷酸化并從受體上解離,而后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中調(diào)控基因表達(dá)。近來有研究表明STAT3的Lys685會發(fā)生乙?；揎?并且對它二聚體的穩(wěn)定形成和促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄非常重要。
　　 為了進(jìn)一步研究STAT3的乙?；c磷酸

2、化修飾之間的關(guān)系和對STAT3活性調(diào)節(jié)的重要性,我們首先構(gòu)建了STFAT3的一系列突變體,然后應(yīng)用Western blot和熒光素酶報告基因檢測等方法得出STAT3的Lys383、Lys707、Lys709位也可以發(fā)生乙?；揎?。并且當(dāng)Lys709突變之后,STAT3Tyr705的磷酸化幾乎消失,證明乙?；瘜α姿峄瞧鹫{(diào)節(jié)作用的。另外,CBP可以增強(qiáng)STAT3Ser727的磷酸化,增強(qiáng)STAT3的轉(zhuǎn)錄活性。STAT3乙酰化位點突變之后自

3、身的轉(zhuǎn)錄活性降低,因此乙酰化對STAT3的轉(zhuǎn)錄活性是有貢獻(xiàn)的。
　　 SIRT5是屬于ClassⅢ的HDACs,研究表明SIRT5定位于線粒體中,而且可以調(diào)節(jié)CSP1的去乙?；?但是其它的生物學(xué)功能和特性并不明確。為了探究SIRT家族是否參與STAT3的去乙?；{(diào)節(jié),我們用SIRT家族的siRNA實驗和在293T細(xì)胞中的過表達(dá)實驗篩選出SIRT1,SIRT5,SIRT7可以使STAT3去乙?；?其中SIRT1,SIRT5可以完全

4、逆轉(zhuǎn)CBP對STAT3的乙?；?而SIRT7只能部分逆轉(zhuǎn)。通過熒光素酶報告基因檢測,發(fā)現(xiàn)SIRT1、SIRT5、SIRT7可以使得STAT3的轉(zhuǎn)錄活性降低,其中SIRT7對STAT3活性降低的影響最為明顯,SIRT5最小,SIRT1居于兩者之間。我們還通過實驗證實去乙酰化酶SIRT5可以被CBP/p300乙?；?并初步得出結(jié)論過表達(dá)后的SIRT‘5沒有轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。這些結(jié)論對今后更好地研究SIRT5的生物學(xué)特性以及對STAT3的調(diào)節(jié)機(jī)