偶氮染料的致突變分子機制及其毒代動力學研究.pdf

1、目的：
　　通過制備偶氮染料毒性物質(zhì)陽性暴露SD大鼠實驗動物模型，利用組織病理學切片診斷技術(shù)和免疫組織化學法觀察分析，進而探討偶氮染料對實驗動物機體的致突變損害和分子機制；采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定量分析技術(shù)，開展偶氮染料在動物體內(nèi)的毒性蓄積、組織分布及毒代動力學研究，對大鼠陽性暴露的損害進行定量評估，為臨床上偶氮染料物質(zhì)暴露污染提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　(1)、通過制備偶氮染料陽性暴露的SD大鼠動物模型

2、，結(jié)合病理學石蠟切片HE染色，對染料物質(zhì)引起的損害進行病理學診斷分析。
　　(2)、采用EnVision免疫組化法檢查肝臟和腎臟器官中CYP1A1基因的蛋白表達水平，從分子生物學水平討論其毒害程度和分子機制。
　　(3)、建立了生物基質(zhì)中4種染料物質(zhì)的超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UFLC-MS/MS）的定量分析方法，并實際應用于實驗動物的組織分布、蓄積及毒代動力學的研究分析和定量評估。
　　結(jié)果：
　　(1)、偶氮

3、染料陽性處理組的大鼠肝組織均出現(xiàn)了不同程度的空泡癥狀，細胞間隔變厚，肝細胞脂肪變性，出現(xiàn)了大小不等的脂肪滴；腎臟組織出現(xiàn)程度不同的腎小管上皮細胞變性壞死，細胞界限模糊，對大鼠肝臟、腎臟造成了損傷危害。
　　(2)、偶氮染料對大鼠肝臟CYP1A1表達分析結(jié)果顯示空白對照組和蘇丹染料處理組的平均陽性指數(shù)（IHC index）分別為138.89、1651.9、1220.35、490.16、1347.22，腎臟表達的陽性指數(shù)分別為17.6

4、9、295.68、128.31、196.73、400.33。說明偶氮染料處理組的肝細胞CYP1A1基因的蛋白表達水平明顯高于對照組，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），表明上調(diào)了該基因的蛋白表達水平，引起毒性效應和致?lián)p傷作用。
　　(3)、針對不同基質(zhì)的生物樣品（血液、器官、組織等）成功建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測法（LC-MS/MS），該方法快速、穩(wěn)定、低定量限（sub-ppb），適用于偶氮染料物質(zhì)殘留定量測定的實際工作，是生

5、物樣品中偶氮染料測定的穩(wěn)健的定量方法。
　　(4)、在50 mg/kg4種蘇丹染料的灌胃劑量下，組織分布實驗中殘留蓄積濃度值最高的是脂肪組織，含量最低的是心臟。
　　(5)、4種偶氮染料分別于灌胃給藥0.6046、1.362、4.196、4.341 h后，大鼠的血藥濃度達到最大值（Cmax分別為630.91、696.26、349.39、1304.61μg/L），在實驗大鼠體內(nèi)的平均半衰期（t1/2）分別為1.208 h、2.

6、611 h、3.449 h、3.411 h，藥-時曲線下面積值(AUC0-∞)分別為1150.03、2966.66、2706.37、10013.91μg·h/L，表明各種物質(zhì)在動物機體內(nèi)的生物利用度高、吸收速度快。
　　結(jié)論：
　　偶氮染料陽性暴露對SD大鼠動物機體肝臟和腎臟產(chǎn)生了病理學損害作用，通過上調(diào)肝臟和腎臟內(nèi)的CYP4501A1基因的蛋白表達水平，引起毒性效應和致?lián)p傷作用；偶氮染料在動物機體中易在組織器官內(nèi)產(chǎn)生蓄積，