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文檔簡(jiǎn)介
1、本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱后,小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,并持續(xù)到SD大鼠青春期,且在青春期和成年期多巴胺能神經(jīng)元受損傷。已有多項(xiàng)研究表明小膠質(zhì)細(xì)胞的激活可能介導(dǎo)或參與了多巴胺能神經(jīng)元的損傷。以上研究提示我們,暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的SD大鼠在其新生期已經(jīng)存在多巴胺能神經(jīng)元損傷的潛在因素。課題組前期研究還發(fā)現(xiàn)新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱,腦勻漿超氧化物岐化酶含量減少,丙二醛含量及腦蛋白羰基表達(dá)增高,提示腦組織氧
2、化應(yīng)激可能參與了毒死蜱神經(jīng)毒作用。氧化應(yīng)激是由于機(jī)體高活性分子如氧自由基(reactive oxygen species,ROS)等產(chǎn)生過多、超過了機(jī)體清除能力而產(chǎn)生。而ROS的產(chǎn)生主要來源于線粒體,當(dāng)線粒體損傷時(shí),ROS產(chǎn)生增多,同時(shí)線粒體本身又是ROS氧化損傷的靶點(diǎn),如此可形成線粒體損傷的惡性循環(huán)。所以,本課題在以上研究的基礎(chǔ)上提出假設(shè),亞中毒閾劑量毒死蜱可致新生SD大鼠中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元線粒體損傷。
目的:探討新生
3、SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)對(duì)中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元線粒體的影響
方法:新生11-14天SD大鼠85只,隨機(jī)分組為毒死蜱組(CPF組,n=29)和對(duì)照組(n=56)。對(duì)照組又分為溶劑二甲亞砜對(duì)照組(DMSO組,n=29)和生理鹽水對(duì)照組(NS組,n=27)。按照課題組前期方法建立新生SD大鼠暴露亞中毒閾劑量毒死蜱的動(dòng)物模型。動(dòng)物在注藥完畢后24h、72h、6d處死。①用免疫組化法和Wes
4、ternBlotting法檢測(cè)中腦黑質(zhì)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ亞基1(NADHdehydrogenase subunit1,ND1);②免疫組化法檢測(cè)中腦黑質(zhì)細(xì)胞色素C(Cytochrome C,Cyt C);③在72h隨機(jī)取毒死蜱組、二甲亞砜對(duì)照組中腦黑質(zhì)用醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)變化;④在72h隨機(jī)取毒死蜱組、二甲亞砜對(duì)照組中腦黑質(zhì)用免疫組化染色后透射電鏡下觀察染色酪氨酸羥化酶(TyrosineHydroxylas
5、e,TH)陽(yáng)性細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化。所有數(shù)據(jù)用均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,所有資料采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果:⑴線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ亞基1即ND1表達(dá)有變化,毒死蜱組和對(duì)照組比較,表達(dá)明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);毒死蜱組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑵線粒體呼吸鏈Cyt C表達(dá)有變化,毒死蜱組與對(duì)照組在72h、6d時(shí)間點(diǎn)上比較,表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
6、(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組表達(dá)隨著各時(shí)間點(diǎn)的遞增而遞增,呈時(shí)間依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑶醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色法電鏡下可見毒死蜱組多巴胺能神經(jīng)元水腫,胞質(zhì)內(nèi)容稀少,其內(nèi)線粒體少見并水腫,有空泡形成;而二甲亞砜對(duì)照組多巴胺能神經(jīng)元無水腫,胞質(zhì)內(nèi)容豐富,其內(nèi)線粒體較多,形態(tài)基本正常,呈桿狀和粒狀,無水腫及空泡形成。⑷TH免疫組織化學(xué)染色后電鏡下可見毒死蜱組陽(yáng)性細(xì)胞(即多巴胺能神經(jīng)元)內(nèi)線粒體明顯水腫,有大量空泡形成,數(shù)量較少
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