以PAI-1為靶點(diǎn)的具有減肥作用的復(fù)方中藥制劑的初步篩選.pdf

1、目的：利用MTT及熒光定量PCR技術(shù)，以3T3-L1細(xì)胞系為工具，研究6種中藥復(fù)方制劑對(duì)人纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）基因表達(dá)的影響，觀察不同濃度方劑制劑 PAI-1mRNA的表達(dá)情況，了解其影響因素，探討中藥復(fù)方制劑在治療肥胖癥中的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　　1．制備6種不同中藥方劑的水溶性提取物(ECMH)，體外培養(yǎng)3T3-L1小鼠前體脂肪細(xì)胞，分別以不同濃度（0.001、0.01、0.1、1、10）mg

2、/ml的ECMH刺激3T3-L1前體脂肪細(xì)胞24h，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)和MTT法判斷其對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，初步篩選出對(duì)細(xì)胞有影響但損傷較小的最佳藥物濃度；
　　2．采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)6種ECMH對(duì)小鼠3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分泌因子PAI-1 mRNA水平的影響，根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果篩選可用于減肥的中藥復(fù)方制劑。
　　結(jié)果：
　　1．ECMH刺激3T3-L1前體

3、脂肪細(xì)胞24h后均使細(xì)胞發(fā)生形態(tài)變化，不同濃度 ECMH均可不同程度地抑制3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖。除小承氣湯外，各方劑ECMH1mg/ml均為抑制率最高的濃度，與正常對(duì)照組相比，減肥膠囊、防風(fēng)通圣散、防己黃芪湯、澤瀉湯四方各濃度均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，除參苓白術(shù)散10mg/ml，小承氣湯100ug/ml、1ug/ml外，此兩種復(fù)方其余各濃度均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　2．RT-PCR技術(shù)檢測(cè)得出，6種中藥復(fù)方制劑3種不同濃度ECMH對(duì)

4、脂肪細(xì)胞PAI-1 mRNA表達(dá)均具有不同程度的促進(jìn)作用。與正常組相比，防風(fēng)通圣散、小承氣湯、參苓白術(shù)散三種復(fù)方三種不同濃度均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，澤瀉湯1mg/ml，減肥膠囊10mg/ml、防己黃芪湯10mg/ml不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此三方其余各濃度均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、6種中藥復(fù)方制劑不同濃度均可抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖。
　　2．6種中藥復(fù)方制劑均可促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞 PAI-1的表達(dá)，