線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響探-.pdf

1、背景:人類的各種社會活動,主要是鹵代烴類的排放,導(dǎo)致平流層臭氧空洞形成,這使得日光到達(dá)地面的有害射線增多。日光照射是一個已明確的導(dǎo)致人類皮膚光老化和皮膚癌發(fā)生的自然因子。長期的日照對皮膚的損害主要表現(xiàn)為皮膚光老化和暴露部位皮膚腫瘤的多發(fā)。光損傷誘導(dǎo)多種類型的線粒體DNA缺失在光老化皮膚及暴露部位皮膚腫瘤中大量累積已被廣泛證實(shí),但其生物學(xué)意義仍有待進(jìn)一步闡明。細(xì)胞凋亡在皮膚光老化和日光相關(guān)皮膚腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要意義,一方面,日光誘

2、導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可使皮膚組織中的細(xì)胞成份減少,從而出現(xiàn)退行性的老化改變;另一方面,出現(xiàn)了基因突變的細(xì)胞如果不能及時凋亡則可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。日光照射是否能通過對線粒體DNA的作用影響細(xì)胞的凋亡目前還不是很清楚。本研究以線粒體DNA缺失細(xì)胞(Rho°206細(xì)胞)及其母本細(xì)胞(143B細(xì)胞)為模型,利用模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,進(jìn)而探討線粒體DNA對凋亡的影響,為闡明線粒體DNA缺失在慢性皮膚光損傷中的作用提供依據(jù)。
　　目的:通過研究模

3、擬日光照射誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡,探討線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響及其可能機(jī)制。
　　方法:1、TEM觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。2、普通光學(xué)顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量(177mJ/cm2+3.39J/cm2、354mJ/cm2+6.78J/cm2、531mJ/cm2+10.17J/cm2和708mJ/cm2+13.56J/cm2)誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。3、H

4、oechst33258染色熒光顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。4、采用流式細(xì)胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞的凋亡情況。5、采用流式細(xì)胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞的活性氧簇水平。
　　結(jié)果:1、形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示,在照射組中,兩細(xì)胞都出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。和143B細(xì)胞相比,線粒體DNA缺失細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組誘

5、導(dǎo)的凋亡效應(yīng)較輕。而在假照射組中,兩細(xì)胞的凋亡形態(tài)未見明顯差異。2、AnnexinV/7-AAD檢測結(jié)果顯示,在假照射組,143B細(xì)胞的凋亡率(9.23±0.85％)和Rho°206細(xì)胞(9.10±1.20%)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而在照射組中,143B細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組凋亡率分別為30.51±1.61%、39.76±1.15%、46.56±1.30%和55.86±1.81%,Rho°206細(xì)胞凋亡率分別為22.93±

6、1.15%、27.26±0.91%、36.10±1.20%和39.53±1.15%,同一細(xì)胞不同劑量組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩細(xì)胞同樣照射劑量組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平結(jié)果顯示,在假照射組,143B細(xì)胞的ROS水平(8.25±0.86%)和Rho°206細(xì)胞(8.15±0.92%)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而在照射組中,143B細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組ROS

7、水平分別為21.41±1.04%、24.82±1.12%、28.85±1.07%和32.78±1.14%,Rho°206細(xì)胞ROS水平分別為14.99±1.17%、18.36±1.05%、24.44±1.14%和27.61±1.11%,同一細(xì)胞不同劑量組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩細(xì)胞同樣照射劑量組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:1、模擬日光照射可誘導(dǎo)線粒體DNA缺失細(xì)胞及其母本細(xì)胞凋亡,且其