保存全血中胞外泛素對輸血相關(guān)免疫調(diào)節(jié)影響的初步研究.pdf

1、目的：全血保存過程中蓄積在血漿中的生物活性分子輸入患者體內(nèi)后調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。在引起輸血相關(guān)免疫調(diào)節(jié)的生物活性分子中，保存血漿中的游離泛素可能起到很重要的作用，可能作為主要作用物質(zhì)，也可能協(xié)同其它活性分子共同作用。本次實驗檢測全血儲存過程中，血漿中胞外泛素濃度改變在體外實驗中對人外周血單個核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響，初步探討胞外泛素對Th1/Th2細(xì)胞分化的影響，分析泛素在輸血相關(guān)免疫調(diào)節(jié)中的作用。
　　方法：(1

2、)血庫專用白細(xì)胞濾器過濾新鮮采集的正常供者全血做為去白細(xì)胞全血，未過濾白細(xì)胞的全血作為對照。(2)收集不同保存時間的全血血漿，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測儲存過程中全血血漿中的泛素濃度。(3)通過增加外源性泛素以及用泛素抗體封閉35天保存血漿中泛素，觀察保存全血血漿中泛素對淋巴細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8和IL-10分泌的影響，各細(xì)胞因子用ELISA試劑盒檢測。(4)采用熒光定量PCR基因擴(kuò)增技術(shù)，檢

3、測炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-8mRNA表達(dá)水平的改變，同時檢測Th1細(xì)胞因子IFN-γ，Th1轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子T-bet，Th2細(xì)胞因子IL-4，Th2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子STAT6 mRNA表達(dá)水平的改變，進(jìn)而觀察Th1/Th2細(xì)胞分化改變
　　結(jié)果：隨著儲存時間延長，35天的去白細(xì)胞和未去白細(xì)胞全血血漿中泛素濃度升高了146倍和73倍，分別從0天的(18.35±11.87)ng/mL升高到(865.11±83.58)ng/mL，(20

4、.19±10.23) ng/mL升高到(631.01±97.05) ng/mL。35天全血血漿及0天加泛素血漿（泛素濃度等同于35天全血血漿）抑制人類外周血單個核細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-2、Th1細(xì)胞因子IFN-γ，促進(jìn)IL-8及Th2細(xì)胞因子IL-4分泌。同時，35天去白細(xì)胞全血血漿及0天去白細(xì)胞加泛素全血血漿（泛素濃度與35天去白細(xì)胞全血血漿等同）抑制人外周血單個核細(xì)胞TNF-αmRNA及Th1細(xì)胞因子IFN-γ和Th

5、1轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子T-bet mRNA的表達(dá);促進(jìn)IL-8mRNA及Th2細(xì)胞因子IL-4和Th2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子STAT6mRNA的表達(dá)。全血血漿對以上細(xì)胞因子分泌及mRNA表達(dá)的促進(jìn)或抑制作用可以被泛素抗體解除。
　　結(jié)論：儲存全血血漿中升高的泛素在輸血相關(guān)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中發(fā)揮重要作用，可引起淋巴細(xì)胞因子分泌偏移，Th1/Th2細(xì)胞分化偏向Th2方向，Th1細(xì)胞分化受抑制，機(jī)體細(xì)胞免疫功能受抑制，抗腫瘤及抗感染能力下降。儲存全血中的胞外