兔Epi-LASIK上皮瓣對角膜基質(zhì)TGF-β-,1-、bFGF表達及細胞凋亡影響的實驗研究.pdf

1、研究背景： Epi—LASIK(epitheliallaserinsitukeratomileusis，機械法激光上皮下角膜磨鑲術(shù))具有良好的安全性、有效性、可預(yù)測性和穩(wěn)定性。但是，與LASIK(laserinsitukeratomileusis，激光原位角膜磨鑲術(shù))相比，Epi—LASIK術(shù)后患者視力恢復(fù)慢、術(shù)后疼痛，尤其是haze(上皮下霧狀混濁)的發(fā)生率較高成為制約其應(yīng)用的主要因素。 Haze的產(chǎn)生伴隨于角膜創(chuàng)傷愈

2、合修復(fù)過程，近年來關(guān)于角膜創(chuàng)傷愈合修復(fù)的研究認為：上皮細胞的損傷可以引起基質(zhì)細胞凋亡；角膜基質(zhì)細胞凋亡是啟動修復(fù)過程的主要因素；修復(fù)過程中伴隨多種細胞因子如TGF-β1、bFGF等的協(xié)同作用。還有研究認為LASEK術(shù)后角膜上皮的愈合是自外而內(nèi)上皮細胞分裂增殖的重新覆蓋。綜合多項研究結(jié)果，Epi—LASIK術(shù)中保留的上皮瓣可能是引起基質(zhì)細胞凋亡從而啟動角膜創(chuàng)傷愈合修復(fù)過程的因素之一，因此對于Epi—LASIK上皮瓣在角膜創(chuàng)傷愈合修復(fù)過程所

3、起的作用值得進一步探討。 第一部分：Epi-LASIK與LASEK上皮瓣細胞培養(yǎng)及增殖能力檢測 目的:探討激光上皮下角膜磨鑲術(shù)(laser—assistedsubepithelialkeratomileusis，LASEK)與機械法激光上皮下角膜磨鑲術(shù)(epitheliallaserinsitukeratomileusis，Epi—LASIK)后角膜上皮愈合方式。 方法:取行LASEK及Epi—LASIK的人角膜

4、上皮瓣各20例、兔角膜上皮瓣各12例，和兔角膜緣組織12例，采用細胞法和組織塊法進行上皮瓣細胞及角膜緣細胞培養(yǎng)，并采用可溶性噻唑鹽(WST—8)法檢測和比較細胞增殖能力。采用SPSS11.5軟件應(yīng)用獨立樣本t檢驗和單向方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果:對人和兔上皮瓣細胞連續(xù)觀察2周，僅見少量細胞生長或未見細胞生長，人LASEK組細胞增殖能力較Epi—LASIK組低，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.907,P=0.000)，兔

5、LASEK組細胞增殖能力較Epi—LASIK組低，兩組差異無顯著性(P=0.255)，兔LASEKa、Epi—LASIKb組細胞增殖能力均低于角膜緣組且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(Pa=0.000,Pb=0.005)。 結(jié)論:離體上皮瓣細胞增殖能力低下，且LASEK上皮瓣細胞增殖能力低于Epi—LASIK，從細胞增殖能力的角度分析顯示LASEK和Epi—LASIK術(shù)后角膜創(chuàng)傷愈合過程并非依靠角膜上皮瓣的原位生長，而是以角膜緣干細胞的分

6、裂增殖為主導(dǎo)。 第二部分：兔Epi-LASIK上皮瓣對角膜基質(zhì)TGF-β1、bFGF表達及細胞凋亡的影響 目的:比較兔Epi—LASIK去除上皮瓣和保留上皮瓣對于轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)在角膜基質(zhì)的表達及基質(zhì)細胞凋亡水平的不同，探討上皮瓣對角膜創(chuàng)傷愈合過程的影響。 方法:45只新西蘭大白兔，3只作為陰性對照，21只行傳統(tǒng)Epi—LASIK保留上皮瓣，余21只行Epi—

7、LASIK去除上皮瓣。分別于術(shù)后4小時、1日、3日、5日、7日、15日、30日每組各取6眼，通過免疫組織化學(xué)法和末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口末端標(biāo)記技術(shù)(terminaldeoxynucleotidyltransferase—mediateddUTPnick—end—labeling,TUNEL)，對角膜基質(zhì)TGF-β1、bFGF的表達及基質(zhì)細胞凋亡水平進行檢測，并觀察各組術(shù)后角膜上皮愈合情況和haze的發(fā)生及程度。采用SPSS11.5

8、軟件應(yīng)用x2檢驗、獨立樣本t檢驗和重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果:留瓣組在角膜基質(zhì)TGF-β1、bFGF表達及基質(zhì)細胞凋亡水平方面均高于去瓣組，兩組基質(zhì)細胞凋亡水平的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.452.P=0.042)，角膜基質(zhì)TGF-β1a、bFGFb的表達水平兩組差異無顯著性(Fa=0.552，Pa=0.475；Fb=1.602，Pb=0.234)；留瓣組上皮愈合時間較去瓣組長，兩組差異無顯著性(t=0.6