大鼠尿液中蝶呤類化合物及氨基酸分析方法的研究及其應(yīng)用.pdf

1、據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，蝶呤類及氨基酸類化合物參與生物體新陳代謝，并在其中扮演重要角色。當(dāng)受到癌癥或其它疾病侵害時(shí)，其在體液中的含量往往會(huì)發(fā)生改變，有可能作為癌癥早期診斷標(biāo)志物。本文從體液中蝶呤類化合物及氨基酸類化合物的分析測(cè)定方法、樣品前處理技術(shù)、與腫瘤相關(guān)性研究及膀胱癌模型建立等四個(gè)方面的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用色譜分析技術(shù)，建立了大鼠尿液中黃蝶呤、異黃蝶呤、酪氨酸及色氨酸的同時(shí)分析方法，并應(yīng)用在大鼠膀胱癌模型尿液的檢測(cè)，對(duì)膀

2、胱癌腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行了初步的探索。其主要研究成果如下:
　　 1.目的使用N-丁基-N-（4-羥丁基）-亞硝基胺(BBN)誘發(fā)建立大鼠膀胱癌模型，并對(duì)病理學(xué)診斷結(jié)果和核磁影像(MRI)診斷結(jié)果進(jìn)行比較。方法將112只6周齡的SD大鼠按體重隨機(jī)分為兩組，其中對(duì)照組42只大鼠，模型組70只大鼠。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后開始對(duì)模型組進(jìn)行癌癥模型造模，將模型組大鼠每天給與含0.05％BBN的飲用水自由飲用，對(duì)照組給與普通自來水自由飲用。實(shí)驗(yàn)持續(xù)B

3、BN給藥35周，每隔5周對(duì)模型組大鼠和對(duì)照組大鼠進(jìn)行MRI掃描及病理學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死所有動(dòng)物進(jìn)行病理學(xué)檢查。結(jié)果第15周時(shí)，模型組大鼠病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞具有一定異型性，判定為膀胱癌，而MRI掃描膀胱壁完整光滑，未見異常。第25周時(shí)，模型組大鼠MRI掃描發(fā)現(xiàn)膀胱壁增厚，膀胱低信號(hào)帶表淺處被腫瘤中等信號(hào)侵潤(rùn)并且密度不均勻，診斷為膀胱癌。35周所有模型組大鼠的病理學(xué)檢查均為膀胱癌，對(duì)照組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)MRI掃描均未發(fā)現(xiàn)腫瘤組

4、織，病理檢查結(jié)果顯示正常。結(jié)論用BBN化學(xué)誘導(dǎo)建立大鼠膀胱癌模型十分簡(jiǎn)便，成瘤率高;病理學(xué)檢查診斷膀胱癌較MRI診斷早。
　　 2.建立了大鼠尿液中黃蝶呤、異黃蝶呤、酪氨酸和色氨酸的UPLC-DAD分析方法，選擇肌酐作為內(nèi)標(biāo)物來減少個(gè)體差異的影響。大鼠尿液利用甲醇除蛋白后，采取C18固相萃取小柱進(jìn)行凈化，然后用UPLC-DAD法進(jìn)行測(cè)定，五種物質(zhì)的儀器檢測(cè)限分別為0.011 mg/L、0.007 mg/L、0.030 mg/L、

5、0.025 mg/L和0.003 mg/L，加標(biāo)回收率除黃蝶呤在60.8％～80.7％之間，其余各物質(zhì)回收率均在96.3％～106.3％之間，RSD小于9.85％。
　　 3.建立了大鼠尿液中黃蝶呤、異黃蝶呤、酪氨酸和色氨酸的UPLC-FLD分析方法，大鼠尿液利用甲醇和乙腈除蛋白后，采取C18固相萃取小柱進(jìn)行凈化，然后用UPLC-FLD法進(jìn)行測(cè)定，四種物質(zhì)的儀器檢測(cè)限分別為5μg/L、0.3μg/L、4μg/L和2μg/L，加標(biāo)

6、回收率除黃蝶呤在61.1％～78.0％之間，其余各物質(zhì)回收率均在85.0％～110.0％之間，RSD小于10.2％。
　　 4.建立了大鼠尿液中肌酐、黃蝶呤、異黃蝶呤、酪氨酸和色氨酸的UPLC-DAD-FLD分析方法，大鼠尿液利用甲醇和乙腈除蛋白后，采取C18固相萃取小柱進(jìn)行凈化，然后用UPLC-DAD-FLD法進(jìn)行測(cè)定，五種物質(zhì)的儀器檢測(cè)限分別為5μg/L、5μg/L、0.3μg/L、10μg/L和3μg/L，加標(biāo)回收率除黃蝶