化合物二(1-(4-(二甲氨基)苯亞甲基氨基)硫脲)鈀(Ⅱ)的抗腫瘤活性及作用機制研究.pdf

1、縮氨基硫脲類席夫堿化合物及金屬配合物近年來受到世界各國生物、化學、醫(yī)藥領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，這類化合物具有抗菌、抗病毒、抗結(jié)核、抗癌等多方面的生物活性。近幾年來，有關(guān)希夫堿金屬配合物抗腫瘤活性的研究有一定報道，然而關(guān)于此類化合物的抗腫瘤作用機制的研究報道還比較少。因此，研究縮氨基硫脲希夫堿金屬配合物的生物活性及其作用機制，對開發(fā)新型高效、低毒的抗癌藥物具有重要意義。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人胃癌細胞系BGC-823、SGC

2、-7901及裸鼠荷胃癌模型為實驗對象，研究兩種縮氨基硫脲希夫堿鈀金屬配合物:二（1-（4-（二甲氨基）苯亞甲基氨基）硫脲）鈀(Ⅱ)(DMABTSPd)與二（1-（4-（二甲氨基）苯亞甲基氨基）-4-苯基縮氨基硫脲）鈀(Ⅱ)(DMABPTSPd)的抗腫瘤生物學活性，并初步探討其作用機制，同步采用正常胃粘膜細胞株GES-1作為參考，檢測目標化合物對正常細胞的毒副作用。同時，建立裸鼠皮下移植瘤模型從動物水平檢測上述化合物對腫瘤增殖的作用及體外

3、細胞中的觀察數(shù)據(jù)。
　　 體外細胞研究結(jié)果:采用MTT法分別測定兩種細胞系經(jīng)不同濃度目標化合物（DMABTSPd與DMABPTSPd）處理后的細胞存活率，數(shù)據(jù)表明DMABTSPd對BGC823和SGC7901細胞具有明顯的存活抑制作用，它們的存活率與化合物呈劑量-時間依賴關(guān)系，DMABPTSPd對BGC823和SGC7901細胞的存活率沒有影響;采用DAPI染色與AnnexinV/PI雙染試劑盒經(jīng)熒光顯微鏡與流式細胞儀檢測DMA

4、BTSPd是否具有在體外誘導(dǎo)人胃癌細胞發(fā)生凋亡的能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DMABTSPd可有效誘導(dǎo)BGC-823和SGC-7901細胞發(fā)生凋亡，而DMABPTSPd沒有明顯誘導(dǎo)BGC823和SGC7901細胞凋亡。進一步，通過Rho123染色的方法檢測不同濃度目標化合物處理24h的BGC823和SGC7901細胞線粒體跨膜電位的變化，并采用WesternBlot方法檢測與細胞凋亡相關(guān)的信號分子的蛋白表達水平，結(jié)果顯示DMABTSPd在體外可有效降

5、低細胞線粒體跨膜電位、剪切PARP-1、抑制Bcl-2的表達和促進Bid的表達，DMABPTSPd的加入無明顯作用。同時觀察到DMABTSPd對正常人胃粘膜細胞GES-1基本無不良影響。
　　 體內(nèi)動物模型研究結(jié)果:皮下注射體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型，瘤體皮下注射DMABTSPd與DMABPTSPd，形態(tài)學技術(shù)測量瘤體重量、大小等;組織學技術(shù)檢測裸鼠肝臟結(jié)構(gòu)變化、TUNEL試劑盒檢測腫瘤細胞凋亡變

6、化;免疫組化的方法檢測細胞增殖標志性蛋白Ki-67的表達水平與凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bid的表達量。結(jié)果表明，有效劑量的DMABTSPd在裸鼠體內(nèi)可抑制腫瘤增殖并抑制Ki-67的表達，同時可以下調(diào)Bcl-2表達和上調(diào)Bid的表達，DMABPTSPd對瘤體無明顯作用。另外，我們也觀察到該化合物對裸鼠肝臟沒有明顯損傷。
　　 綜上所述，本論文的研究結(jié)果證實了兩種縮氨基硫脲希夫堿鈀金屬配合物之一的DMABTSPd具有抑制人胃癌細胞存

7、活增殖及誘導(dǎo)凋亡發(fā)生的能力，并DMABTSPd誘導(dǎo)人胃癌細胞的凋亡與Bcl-2、Bid介導(dǎo)的線粒體通路有關(guān)。這些結(jié)果不僅在細胞與動物水平證實縮氨基硫脲類希夫堿及金屬配合物的抗腫瘤活性，并且初步提出該化合物可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，在其中Bcl-2與Bid信號分子發(fā)揮重要作用，從而為DMABTSPd作為基于Bcl-2/Bid分子靶點的抗胃癌藥物開發(fā)提供一定的理論依據(jù)，也為縮氨基硫脲類希夫堿金屬配合物作為先導(dǎo)物進一步開發(fā)新型抗腫瘤