中藥抗癆膠囊與抗癆丸的質(zhì)量控制研究.pdf

1、抗癆膠囊與抗癆丸是主要用于治療肺結(jié)核的中成藥。這兩種藥物的主要成分均為矮地茶、百部、穿破石、五指毛桃、白及、桑白皮，其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)均沿用部頒標(biāo)準(zhǔn)，僅用化學(xué)鑒別法來做主要成分鑒別，并未采取薄層或高效液相色譜法來做含量測(cè)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制較為單一。本課題擬采用HPLC法建立抗癆膠囊與抗癆丸的指紋圖譜，并通過HPLC指紋圖譜全面控制抗癆膠囊與抗癆丸的內(nèi)在質(zhì)量。
　　 巖白菜素（Bergenin）是抗癆膠囊與抗癆丸的主藥矮地茶的有效成分，

2、屬于異香豆素類化合物，具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、護(hù)肝、抗病毒和神經(jīng)保護(hù)作用，現(xiàn)己廣泛應(yīng)用于臨床。本課題對(duì)抗癆膠囊與抗癆丸中有效成分巖白菜素進(jìn)行含量測(cè)定，從而為抗癆膠囊與抗癆丸的質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　 本課題還對(duì)大鼠腸內(nèi)菌對(duì)巖白菜素的轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步研究，以考察其體外代謝情況，為今后更深一步研究提供依據(jù)。
　　 第一部分：抗癆膠囊與抗癆丸的HPLC指紋圖譜分析
　　 目的：通過建立抗癆膠囊與抗癆丸的HPLC指紋圖

3、譜，得到這兩種藥品得對(duì)照指紋圖譜，并通過相似度系統(tǒng)軟件與不同廠家抗癆膠囊指紋特征相比較。
　　 方法：(1)提取條件的選擇：通過比較不同提取方式、提取溶劑、提取時(shí)間等條件，選擇提取成分較多，提取率較高的提取條件。(2)色譜條件的選擇：通過對(duì)不同的流動(dòng)相、波長(zhǎng)、柱溫等影響因素的考察，確定合適的色譜條件。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中巖白菜素峰的理論板數(shù)和分離度。(4)方法學(xué)考察：分別進(jìn)行了精密度、重復(fù)性、

4、穩(wěn)定性等方法學(xué)考察。(5)指紋圖譜的建立：分別取抗癆膠囊1、抗癆丸及抗癆膠囊2樣品，制各樣品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析、相似度評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果：(1)提取條件：采用75％甲醇超聲提取40min，重復(fù)性好，提取效率高。(2)色譜條件：色譜柱為DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.5％磷酸水進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣體積20μl。(

5、3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：巖白菜素色譜峰的理論板數(shù)約為8000，與其它色譜峰的分離度大于1.5。(4)方法學(xué)考察：對(duì)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均小于0.2％，相對(duì)峰面積的RSD值均小于3％，符合方法學(xué)實(shí)驗(yàn)要求。(5)指紋圖譜的建立及數(shù)據(jù)結(jié)果分析：首先得到7批抗癆膠囊1的指紋圖譜及其17個(gè)共有峰，運(yùn)用相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版軟件計(jì)算，7批抗癆膠囊1相似度均在0.9以上，批間差異較小。4批抗癆丸相

6、似度在0.98以上，批間差異較小。
　　 小結(jié)：建立了抗癆膠囊1的HPLC指紋圖譜分析方法，并利用相對(duì)保留值系統(tǒng)和相似度軟件對(duì)不同廠家的抗癆膠囊指紋圖譜分析結(jié)果進(jìn)行了評(píng)價(jià)，本方法簡(jiǎn)便、可靠，為提高抗癆膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。
　　 第二部分：抗癆藥物中有效成分巖白菜素的含量測(cè)定
　　 目的：通過對(duì)抗癆膠囊1，抗癆丸及抗癆膠囊2中的巖白菜素含量進(jìn)行測(cè)定，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制抗癆膠囊與抗癆丸質(zhì)量提供理論依據(jù)。

7、r>　　 方法：(1)提取條件的選擇：通過考察不同提取方式、提取溶劑及提取時(shí)間等方式，選擇提取結(jié)果較為穩(wěn)定且提取效率較高的方法。(2)色譜條件的選擇：分別對(duì)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、柱溫等影響因素進(jìn)行考察，確定最佳色譜條件。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在確定的色譜條件下，考察巖白菜素色譜峰的理論塔板數(shù)和分離度。(4)方法學(xué)考察：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并分別進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性、回收率考察。(5)樣品測(cè)定：在確定的色譜條件下，測(cè)定了7批抗癆膠囊1、2批抗癆膠囊2及4

8、批抗癆丸含量。
　　 結(jié)果：(1)樣品提取方法：用75％甲醇超聲提取40min，可以使各有效成分達(dá)到最大的提取效率，且提取效果較為穩(wěn)定。(2)最佳的色譜條件：C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，以甲醇-水(20:80)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，流速1.0ml/min。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：巖白菜素色譜峰的理論塔板數(shù)約為7000，與其他色譜峰的分離度大于1.5，分離度良好。(4)方法學(xué)考察：

9、巖白菜素在0.007823～0.6258mg/ml的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9999）；日內(nèi)精密度RSD為0.42％，日間精密度為1.56％，樣品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定?？拱A膠囊與抗癆丸回收率范圍均在98.4～102.2％之間。(5)樣品測(cè)定：抗癆膠囊1、抗癆丸和抗癆膠囊2中巖白菜素的平均含量分別為0.56、1.72和5.99mg/g。
　　 小結(jié)：對(duì)抗癆膠囊與抗癆丸中巖白菜素的含量進(jìn)行了測(cè)定，建立了測(cè)定這兩種藥物中巖白菜素含量

10、的HPLC分析方法，其方法簡(jiǎn)便易行、專屬性強(qiáng)、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。從而為保證抗癆膠囊及抗癆丸的質(zhì)量，提供了良好的質(zhì)量控制方法。
　　 第三部分：巖白菜素在大鼠腸內(nèi)菌轉(zhuǎn)化的代謝研究
　　 目的：研究巖白菜素經(jīng)大鼠腸內(nèi)菌體外轉(zhuǎn)化后的代謝情況，并應(yīng)用HPLC法進(jìn)行分析，查看其體外代謝情況。
　　 方法：(1)厭氧培養(yǎng)液的配制：將A液、B液與C液混合后，加蒸餾水至1L，用鹽酸調(diào)pH7.5～8.0。(2)腸內(nèi)菌培養(yǎng)液的配制：將S

11、D大鼠腸內(nèi)容物按0.5g：1.5ml的比例加入?yún)捬跖囵B(yǎng)液，快速攪拌均勻，并用醫(yī)用紗布過濾即得。(3)樣品溶液的制備：將1ml巖白菜素甲醇溶液(1mg/ml)加入裝有腸內(nèi)菌培養(yǎng)液5ml的培養(yǎng)皿中，厭氧溫孵培養(yǎng)8小時(shí)，乙酸乙酯萃取3次，氮?dú)鈸]干，甲醇溶解，離心，取上清液即得。(4)對(duì)照品溶液的制備：按樣品溶液的制備方法分別制備空白Ⅰ（藥物+厭氧培養(yǎng)液）與空白Ⅱ（大鼠糞便+厭氧培養(yǎng)液+等量甲醇）。(5)數(shù)據(jù)處理分析：將樣品與對(duì)照品用HPLC法