PDTC對LPS誘導(dǎo)的角膜基質(zhì)細(xì)胞和角膜炎損傷的干預(yù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：細(xì)菌性角膜炎是臨床常見病和多發(fā)病，嚴(yán)重者可引起角膜潰瘍、穿孔及瘢痕形成，嚴(yán)重影響視功能。炎癥性角膜病發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制是致炎因素促使角膜組織分泌細(xì)胞因子增多及粘附分子表達(dá)增強(qiáng)。研究表明，角膜炎時角膜組織表達(dá)多種與角膜的病理損傷密切相關(guān)的細(xì)胞因子。細(xì)胞因子的表達(dá)受特定轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)在炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中起重要作用，通過對下游多種炎癥相關(guān)基因(TNF-α、IL-1、IL-6等)的轉(zhuǎn)錄，參與多

2、種基因的表達(dá)與調(diào)控，與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞的增生、轉(zhuǎn)化和凋亡等主要病理、生理過程密切相關(guān)。因此，靶向抑制NF-κB活化可望減輕炎癥反應(yīng)。脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的組成部分，是革蘭氏陰性菌致病的主要活性成分。LPS可通過激活NF-κB信號途徑，誘導(dǎo)炎癥因子的表達(dá)，引起細(xì)胞損傷和凋亡，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。角膜基質(zhì)細(xì)胞可以通過識別LPS，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子、促進(jìn)白細(xì)胞浸潤到角膜組織，在角膜防御系統(tǒng)中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)中，①原代培養(yǎng)

3、人角膜基質(zhì)細(xì)胞(HCF<,s>)，用綠膿桿菌LPS刺激HCF<,s>，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測HCF<,s>培養(yǎng)上清中炎性相關(guān)因子白細(xì)胞介素-6(IL-6)和IL-8的分泌，Western b10t檢測tCF<,s> NF-κB的活化表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測HCF<,s> IL-6、IL-8基因的表達(dá)；②建立綠膿桿菌LPS誘導(dǎo)的大鼠急性角膜炎動物模型，用免疫組織化學(xué)的方法原位檢測角膜組織NF-κ Bp65及

4、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)蛋白的表達(dá)、RT-PCR檢測角膜組織IL-6、工CAM-1、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及緊密連接蛋白Occludin基因的表達(dá)，Western blot檢測角膜組織NF-κ Bp65核轉(zhuǎn)位情況及Occludin的蛋白表達(dá)；③以NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作為干預(yù)因素，觀察它以LPS誘導(dǎo)的人角膜基質(zhì)細(xì)胞及大鼠急性角膜組織中NF-kB的活化表達(dá)及相關(guān)因子表達(dá)的影響，并探討其發(fā)

5、生機(jī)制，為發(fā)現(xiàn)角膜炎新的預(yù)防措施和輔助治療提供理論基礎(chǔ)。 目的：觀察核轉(zhuǎn)錄因子一kB在綠膿桿菌LPS誘導(dǎo)的人角膜基質(zhì)細(xì)胞和大鼠急性角膜炎角膜損傷的作用，探討PDTC的干預(yù)作用及其機(jī)制。 結(jié)論：綠膿桿菌LPS可引起人角膜基質(zhì)細(xì)胞和角膜炎大鼠角膜組織NF-кB的核移位，活化的NF-к B與相關(guān)基因的啟動子或增強(qiáng)子區(qū)結(jié)合以促進(jìn)這些依賴NF-кB的致炎因子基因轉(zhuǎn)錄，參與人角膜基質(zhì)細(xì)胞和急性角膜炎大鼠損傷的病理過程，在角膜炎中起