巨結(jié)腸同源病輔助檢查、手術(shù)方式及術(shù)后石蠟切片的免疫組化染色研究.pdf

1、目的:
　　第一,在所選的97例HD,28例IND和42例HG中,利用統(tǒng)計學(xué)的手段,分別對術(shù)前輔助檢查(包括AchE組化染色、直腸肛管測壓)、手術(shù)方式的選擇進(jìn)行歸納分析,尋找其檢查的陽性指標(biāo)對診斷和治療的指導(dǎo)意義以及不同手術(shù)方式對疾病的影響。
　　第二,本研究共選擇五種腸神經(jīng)標(biāo)志物,包括:1.人蛋白基因產(chǎn)物9.5(ProteinGeneProduct9.5,PGP9.5);2.組織蛋白酶D(CathepsinD,CAD);3

2、.外周蛋白(Peripherin,PR);4.S-100蛋白;5.神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-specificenolase,NSE)。運用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測它們在IND結(jié)腸的表達(dá)特點,進(jìn)而深入硏究腸神經(jīng)元發(fā)育不良癥結(jié)腸的病理學(xué)特征,進(jìn)一步提高其診斷和鑒別診斷的準(zhǔn)確率。
　　方法:
　　167例患者,按HD、IND、HG分三組,對術(shù)前常規(guī)檢查AchE組化染色的結(jié)果分為陰性(-)和陽性(+)兩種進(jìn)行統(tǒng)計;在直腸

3、肛管測壓中,分無反射波、有正常反射波、“W”或“U”形波三種進(jìn)行統(tǒng)計;IND和HG手術(shù)方式分“左半結(jié)腸切除術(shù)”和“結(jié)腸次全切除術(shù)”進(jìn)行統(tǒng)計。
　　PGP9.5、組織蛋白酶D、外周蛋白、S-100和NSE五種抗體,采用過氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素(Streptavidin/Peroxidase)免疫組織化學(xué)染色方法對28例IND結(jié)腸石蠟標(biāo)本切片進(jìn)行染色。
　　光學(xué)顯微鏡下觀察神經(jīng)叢大小,每叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量等。
　　結(jié)果

4、:
　　對比研究發(fā)現(xiàn),AchE組化染色,在IND組的多數(shù)患兒為陰性,在HG組和HD組中,陽性占多數(shù)或絕大多數(shù),這也是IND與HG、HD非同尋常的差異。提示由于IND的腸道神經(jīng)系統(tǒng)存在,遠(yuǎn)端直結(jié)腸腸壁并沒有大量膽堿能神經(jīng)增生,這也是IND缺少巨結(jié)腸樣的痙攣腸段的主要原因和證據(jù)。在直腸肛管測壓檢查中,IND組不同于HD組,絕大多數(shù)存在肛管抑制反射波,和正常比不同的是存在的反射波絕大多數(shù)呈“W”或“U”型;在手術(shù)方式的選擇上,IND組“

5、結(jié)腸次全切除術(shù)”比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于“左半結(jié)腸切除術(shù)”;反觀HG組,正好相反,“左半結(jié)腸切除術(shù)”比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于“結(jié)腸次全切除術(shù)”。這和傳統(tǒng)的先天性巨結(jié)腸的手術(shù)方式有很大的區(qū)別。
　　五種神經(jīng)標(biāo)志物在正常腸道神經(jīng)系統(tǒng)染色特點:組織蛋白酶D僅在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)為陽性,神經(jīng)叢卻不表達(dá);PGP9.5和外周蛋白在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、腸壁肌間、黏膜下神經(jīng)叢中均有表達(dá);S-100只在黏膜下、肌內(nèi)神經(jīng)叢表達(dá),神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中不表達(dá),形成細(xì)胞狀空白區(qū);NSE在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞

6、漿呈褐色的強陽性反應(yīng),環(huán)形肌內(nèi)的神經(jīng)纖維為棕黃色細(xì)波紋狀表達(dá),施旺細(xì)胞和周圍細(xì)胞不著色,呈陰性反應(yīng)。
　　腸神經(jīng)元發(fā)育不良癥(IND)的免疫組化染色光鏡下觀察分析:1神經(jīng)叢:神經(jīng)叢縱橫徑均明顯大于正常。2節(jié)細(xì)胞計數(shù):IND的節(jié)細(xì)胞明顯增加,通常在6個以上,部分甚至超過10個。
　　結(jié)論
　　AchE組化染色、直腸肛管測壓檢查是診斷HD的重要方法,但同時對于巨結(jié)腸同源病的診斷和鑒別診斷,也具有較高的價值意義。先天性巨結(jié)腸

7、的手術(shù)方式千變?nèi)f化,巨結(jié)腸同源病的手術(shù)方式主要分兩種,根據(jù)具體情況需要選擇施行“結(jié)腸次全切術(shù)”或者“左半結(jié)腸切除術(shù)”,在HG組和IND組中,兩者分別所占的比例也是不一樣的,HG組所選手術(shù)多半為“左半結(jié)腸切除術(shù)”,IND組則多選用“結(jié)腸次全切除術(shù)”。這說明,對于IND的治療以結(jié)腸次全切為主,HG則應(yīng)該以左半切除為主。
　　免疫組織化學(xué)方法檢測腸道神經(jīng)系統(tǒng)的PGP9.5、組織蛋白酶D、外周蛋白、S-100和NSE表達(dá)有相當(dāng)高的特異性結(jié)