磷酸化AKT和NF-κBp65在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景與目的 卵巢惡性腫瘤是女性生殖器三大惡性腫瘤之一，其早期診斷率低，轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后較差。對(duì)于卵巢癌發(fā)病機(jī)理的研究仍有許多問(wèn)題有待于解決，近來(lái)信號(hào)傳導(dǎo)通路在腫瘤發(fā)生過(guò)程中的異常改變及其導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)失控的機(jī)制成為研究的熱點(diǎn)。 研究發(fā)現(xiàn)蛋白激酶B(AKT/PKB)信號(hào)傳導(dǎo)通路在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、凋亡、血管生成、轉(zhuǎn)移及耐藥等方面起著重要的作用。在一些病理因素的刺激下，AKT蛋白轉(zhuǎn)錄增加或調(diào)節(jié)異常導(dǎo)致其過(guò)度表達(dá)或異常活化，通過(guò)作

2、用于下游分子，影響細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤惡性生物學(xué)行為?？杀籄KT/PKB通路直接或間接影響的下游分子主要包括細(xì)胞增殖和蛋白合成相關(guān)因子和一些凋亡相關(guān)因子。核轉(zhuǎn)錄因子кB(NF-кB)，作為信號(hào)傳導(dǎo)通路的中樞，是AKT重要的下游分子之一，通常與其抑制蛋白IкB結(jié)合，以無(wú)活性形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。它的主要形式為p50和p65組成的二聚體，p50是DNA結(jié)合的部位，p65參與基因轉(zhuǎn)錄的起始調(diào)節(jié)。NF-кB的異?；罨?/p>

3、可調(diào)節(jié)與細(xì)胞增殖和凋亡有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，并上調(diào)cox2基因表達(dá)間接促進(jìn)血管生成，還通過(guò)調(diào)控細(xì)胞間黏附因子-1(ICAM-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)等，溶解細(xì)胞外間質(zhì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。 AKT及其下游信號(hào)分子在卵巢癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外研究尚少。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SP法檢測(cè)p-AKT(活化AKT)、NF-кBP65在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)情況，并分析其與卵巢癌

4、臨床病理參數(shù)和生存率的關(guān)系及兩種蛋白相關(guān)性，探討磷酸化AKT、NF-кBp65在卵巢上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，為卵巢癌的發(fā)病機(jī)理和預(yù)后分析提供新的理論依據(jù)。 材料與方法 收集鄭州大學(xué)一附院2001年3月～2005年11月病理科存檔的115例石蠟標(biāo)本包括68例卵巢上皮性癌、12例卵巢交界性腫瘤、24例卵巢良性腫瘤和11例卵巢正常組織標(biāo)本(對(duì)照組)，均經(jīng)福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，所有包埋組織切成4μm厚連續(xù)切片以備用。所

5、有患者術(shù)前均未接受放、化療及免疫治療，年齡17歲～73歲，平均年齡50±10．97歲，各組間年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0．05)。68例卵巢上皮性癌患者≥50歲35例，<50歲33例；按照2000年FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期～Ⅱ期34例，Ⅲ期～Ⅳ期34例(Ⅳ期1例，為臍轉(zhuǎn)移)；按照組織病理學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為高、中分化(G<,1>+G<.2>)45例，低分化(G<,3>)23例；漿液性囊腺癌44例，黏液性囊腺癌15例，子宮內(nèi)膜樣癌9例；伴盆腔淋

6、巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，無(wú)轉(zhuǎn)移者50例；伴有腹水者47例，無(wú)腹水者21例。對(duì)有完整隨訪資料的63例卵巢上皮性癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為7～60個(gè)月，截至2006年7月。采用免疫組化SP法檢測(cè)p-AKT和NF-кBp65蛋白在上述組織中的表達(dá)，分析其與卵巢癌臨床病理資料和生存率的關(guān)系及兩種蛋白相關(guān)性。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13．0軟件作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，分別應(yīng)用x<'2>檢驗(yàn)、Kaplan Meire生存曲線，Cox回歸分析和spearman相關(guān)分析等

7、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1．p-AKT和NF-кBp65蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤、卵巢上皮性癌中的表達(dá)。p-AKT蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤、卵巢上皮性癌中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為9．1％(1/11)、12．5％(3/24)、16．7％(2/12)和52．9％(36/68)。運(yùn)用x<'2>檢驗(yàn)對(duì)各組陽(yáng)性率進(jìn)行比較，差異具有顯著性(P<0．01)，行

8、x<'2>分割后分別與正常卵巢(對(duì)照組)比較，卵巢癌p-AKT蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于卵巢正常組織(P=0．007)，卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤與對(duì)照組間差異無(wú)顯著性。NF-кBp65蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤、卵巢上皮性癌中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為27．2％(3/11)、20．8％(5/24)、41．7％(5/12)和75．0％(51/68)。運(yùn)用x<'2>小檢驗(yàn)對(duì)各組陽(yáng)性率進(jìn)行比較，差異具有顯著性(P<0．01)，行

9、x<'2>分割后分別與正常卵巢(對(duì)照組)比較，卵巢癌NF-кBp65蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于卵巢正常組織(P=0．005)，卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤與對(duì)照組間差異無(wú)顯著性。 2．p-AKT和NF-кBp65蛋白表達(dá)與卵巢上皮性癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。p-AKT蛋白在低分化(G<,3>)卵巢癌中表達(dá)陽(yáng)性率為73．9％(17/23)，在高中分化(G<,1>+G<,2>)卵巢癌中表達(dá)陽(yáng)性率為42．2％(19/45)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)意義(x<'2>=6．136，P=0．013)；p-AKT蛋白在晚期卵巢癌(Ⅲ～Ⅳ)中表達(dá)陽(yáng)性率為70．6％(24／34)，在早期卵巢癌(Ⅰ～Ⅱ)中表達(dá)陽(yáng)性率為35．3％(12/4)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=8．500，P=0．004)；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌pAKT表達(dá)陽(yáng)性率為77．8％(14/18)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)率44．0％(22/50)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=6．061，P=0．014)；p-A

11、KT在卵巢癌患者不同年齡、不同組織類型和有無(wú)腹水各分組內(nèi)的表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P>0．05)。NF-кBp65蛋白在低分化(G<,3>)卵巢癌中表達(dá)陽(yáng)性率為95．7％(22/23)，在高中分化(G<,1>+G<,2>)卵巢癌中表達(dá)陽(yáng)性率為64．4％(29/45)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=7．906，．P=0．005)；NF-кBp65蛋白在晚期卵巢癌(Ⅲ～Ⅳ)中表達(dá)陽(yáng)性率為91．2％(31/34)，在早期卵巢癌(Ⅰ～Ⅱ

12、)中表達(dá)陽(yáng)性率為58．8％(20/34)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=9．490，P=0．002)：NF-кBp65蛋白在卵巢癌患者不同年齡、不同組織類型、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無(wú)腹水各分組內(nèi)的表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P>0．05)。 3．卵巢上皮性癌中p-AKT和NF-кBp65蛋白表達(dá)相關(guān)性。在68例卵巢上皮性癌中，分析p-AKT蛋白與NF-кB3p65蛋白的免疫染色強(qiáng)度，p-AKT與NF-кBp65表達(dá)共陽(yáng)性患者31

13、例，共陰性患者12例，結(jié)果表明兩者的表達(dá)水平呈現(xiàn)高度的一致性，經(jīng)spearman相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r<,s>=0．272，P=0．025(P<0．05)，表明p-AKT和NF-кBp65在卵巢上皮性癌中表達(dá)呈正相關(guān)。 4．p-AKT和NF-кBp65蛋白表達(dá)與卵巢上皮性癌預(yù)后的關(guān)系。63例隨訪病例中，存活五年者16例，累計(jì)生存率為25．40％，中位生存時(shí)間為26個(gè)月。34例p-AKT表達(dá)陽(yáng)性患者存活5年者5例，累計(jì)生存率為14．

14、71％，中位生存時(shí)間為20個(gè)月；29例p-AKT蛋白表達(dá)陰性患者存活5年者13例，累計(jì)生存率為37．93％，中位生存時(shí)間為31個(gè)月。p-AKT蛋白陽(yáng)性組5年累計(jì)生存率低于陰性組(14．71％vs 37．93％)，中位生存時(shí)間短于陰性組(20個(gè)月vs 31個(gè)月)，經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)，兩組間有顯著性差異(P=0．009)。50例NF-кBp65蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者存活5年者10例，累計(jì)生存率為20％，中位生存時(shí)間為23個(gè)月;13例NF-кB

15、p65蛋白表達(dá)陰性患者存活5年者6例，累計(jì)生存率46．15％，中位生存時(shí)間為39個(gè)月，NF-кBp65蛋白陽(yáng)性組5年累計(jì)生存率低于陰性組(20％vs 46．15％)，中位生存時(shí)間短于陰性組(23個(gè)月vs 39個(gè)月)，經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)，兩組間有顯著性差異(p=0．041)。對(duì)年齡、組織類型、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹水、p-AKT蛋白、NF-кBp65蛋白8個(gè)因素和卵巢癌預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行單變量和多變量Cox回歸分析，結(jié)果顯示除

16、臨床分期外，其余分析因素均不是影響卵巢癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 結(jié)論 1．p-AKT、NF-KBp65蛋白在卵巢上皮性癌中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于正常卵巢組織，且分別與卵巢癌病理分級(jí)、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示兩者異?；罨龠M(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。 2．在卵巢上皮性癌中，p-AKT和NF-кBp65蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在協(xié)同作用。 3．p-AKT、NF-кBp65蛋