綿羊肺炎支原體莢膜多糖對支氣管上皮細胞炎性反應(yīng)與氧化損傷的作用機制研究.pdf

1、綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae，MO)是從綿羊或山羊支氣管中分離得到的一種最常見的病原菌，主要引起羊支原體肺炎?；疾⊙蚺R床上以漸進性消瘦、高熱、氣喘、持續(xù)性咳嗽、肺和胸膜發(fā)生漿液性和纖維素性炎癥為特征。而與其他支原體相比，目前對于綿羊肺炎支原體致病機制的研究還非常有限，但普遍認為準確的黏附作用應(yīng)當是決定其是否能夠成功感染的關(guān)鍵。綿羊肺炎支原體無細胞壁結(jié)構(gòu)，感染宿主機體時主要通過膜外的莢膜樣物質(zhì)介導(dǎo)菌體與

2、宿主細胞間的相互作用。已有報道證實莢膜多糖（capsular polysaccharides，CPS）是位于綿羊肺炎支原體菌體最外層的一種重要毒力因子，其在菌體抗干燥、粘附、侵入、傳播以及抵抗宿主細胞的固有免疫和特異性免疫防御機制等方面的作用正被逐漸認識。
　　本研究在成功提取并純化了綿羊肺炎支原體模式株Y98莢膜多糖(CPS)的基礎(chǔ)上，制備了CPS的多克隆抗體，并利用綿羊支氣管原代上皮細胞氣液相(air-liquid inter

3、face，ALI)培養(yǎng)模型，對CPS誘發(fā)免疫學(xué)炎性反應(yīng)與氧化損傷過程中的分子機制進行了探究。研究首先發(fā)現(xiàn)，綿羊肺炎支原體CPS刺激ALI支氣管原代上皮細胞后誘導(dǎo)了TLRs級聯(lián)信號通路介導(dǎo)的免疫學(xué)炎性反應(yīng)的發(fā)生。TLRs信號中MyD88、IRAKs、TRAF6、p-NF-κB、p-AP-1、IRF5與TRAF3、TBK1、IRF3等關(guān)鍵通路蛋白與核轉(zhuǎn)錄因子的表達量在CPS刺激后均呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)趨勢，表明TLRs級聯(lián)的MyD88依賴性與M

4、yD88非依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在支氣管上皮細胞響應(yīng)CPS刺激的過程中均扮演重要角色。研究同時發(fā)現(xiàn)CPS抗體的預(yù)處理可以顯著下調(diào)由綿羊肺炎支原體感染所誘導(dǎo)的炎性相關(guān)因子（包括促炎性細胞因子IL1β、IL6、IL8和TNFα等，抑炎性細胞因子IL10和TGFβ等）的高表達，提示CPS是綿羊肺炎支原體的一個重要毒力因子，其致病機制可能是通過誘導(dǎo)支氣管周圍大量炎癥相關(guān)因子的釋放，從而實現(xiàn)對宿主免疫學(xué)炎癥反應(yīng)的調(diào)控。此外，分子機制研究表明綿羊肺炎支

5、原體CPS可以通過線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性途徑與死亡受體介導(dǎo)的外源性途徑同時誘導(dǎo)支氣管上皮細胞的凋亡，JNK/P38 MAPK信號通路在此過程中起重要的促凋亡作用。值得注意的是，CPS誘發(fā)宿主細胞凋亡的過程伴隨ROS的高表達，ROS清除劑NAC的預(yù)處理可以明顯抑制這一現(xiàn)象的發(fā)生，因此提示ROS的過量產(chǎn)生可能是誘導(dǎo)綿羊支氣管原代上皮細胞凋亡的直接因素之一。
　　以上的研究結(jié)果揭示，TLRs信號介導(dǎo)的炎性反應(yīng)與ROS介導(dǎo)的細胞凋亡在支氣管上