鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽力影響的實驗研究.pdf

1、[研究背景] 鐙骨切除術(shù)已在臨床廣泛應(yīng)用于耳硬化癥引起的傳導(dǎo)性聾治療，國內(nèi)外許多臨床資料回顧性研究結(jié)果均顯示鐙骨足板全切術(shù)在治療耳硬化癥后可出現(xiàn)高頻聽力損失，而小窗活塞型人工鐙骨術(shù)在減少術(shù)后并發(fā)癥、改善聽力方面較其它人工鐙骨術(shù)有一定的優(yōu)越性。但目前尚沒有完善詳細的關(guān)于鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽力影響的實驗資料。豚鼠耳生理及解剖雖然與人類似，但尚有一些不同之處，主要是：1)豚鼠的聽骨鏈?zhǔn)怯慑N砧復(fù)合體和鐙骨組成，聽骨較小、足板較薄，術(shù)中易損

2、傷或斷裂；2)鐙骨與周圍重要結(jié)構(gòu)之間的空間狹小，尤其是與面神經(jīng)、水平半規(guī)管距離小。針對豚鼠的上述顳骨解剖特點，采用何種麻醉、手術(shù)及相關(guān)聽力學(xué)檢查方法，建立一個理想的鐙骨切除術(shù)模型對于研究鐙骨切除術(shù)對聽力的影響是至關(guān)重要的。有關(guān)文獻報道，豚鼠作為耳科學(xué)常選的研究對象，由于其免疫力低下、進行手術(shù)或聽力檢查不配合，發(fā)生麻醉意外死亡、術(shù)后感染及手術(shù)并發(fā)癥等實驗干擾因素的幾率增加，從而影響實驗研究的順利完成。因此，首先探討最適的麻醉劑劑量及濃度、

3、最佳的手術(shù)方式及預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生的應(yīng)對措施是必要的。對術(shù)前具備正常聽力的豚鼠進行鐙骨切除術(shù)研究，其術(shù)后聽力必然較術(shù)前有所下降，這不同于臨床資料的分析結(jié)果，而通過分析豚鼠術(shù)后聽力的改變，探討其影響因素，可為進一步比較不同術(shù)式的鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽力影響的實驗研究提供基本依據(jù)。有文獻報道，鐙骨切除術(shù)后的豚鼠聽力有一定程度的下降，但僅簡單提供了聽閾指標(biāo)方面的改變。本實驗旨在通過ABR測試方法，記錄包括反應(yīng)閾在內(nèi)的各種指標(biāo)，為鐙骨切除術(shù)的動物實

4、驗研究提供更詳盡的聽力資料，同時建立一個較完善的動物實驗?zāi)Ｐ汀?[研究目的] 研究鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽功能及形態(tài)學(xué)的影響，探討建立鐙骨切除術(shù)動物模型的可行性及對聽功能改變的影響因素，為進一步進行鐙骨足板全切與足板不同直徑開窗對豚鼠聽力影響的實驗研究提供一定的實驗依據(jù)；同時，回顧性分析臨床耳硬化癥資料，比較鐙骨切除術(shù)不同術(shù)式間的療效差異，為動物實驗研究提供一定的臨床依據(jù)。 [材料方法] (一)實驗對象動物實驗

5、研究：健康雜色豚鼠，體質(zhì)量為300-400g，雌雄不限，耳廓反射靈敏，鼓膜完整、標(biāo)志清楚(二級、南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院實驗動物中心提供)。臨床實驗研究：選擇1993年至2004年期間由三位高級耳科醫(yī)師進行鐙骨全切除術(shù)和足板小孔開窗術(shù)治療的耳硬化癥病人73例(82耳)，排除由其他術(shù)式失敗、作為二次手術(shù)的病例3例、采用皮質(zhì)骨重建聽骨鏈的病例5例、術(shù)中發(fā)現(xiàn)聽骨畸形2例、發(fā)生鐙井噴1例，選定73耳。 (二)實驗方法 1豚鼠鐙骨切除

6、術(shù)模型的建立 1.1不同劑量、濃度戊巴比妥鈉對豚鼠麻醉效果的比較16只(32耳)豚鼠按隨機數(shù)字法完全隨機分為4組，每組4只(8耳)，分別按3％戊巴比妥鈉(40mg/Kg)、3％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)、1％戊巴比妥鈉(40mg/Kg)、1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)麻醉劑量分為1、2、3、4組。實驗前8h豚鼠禁食、禁水，重復(fù)進行3次麻醉，時間間隔為24h，將隨機分組后的豚鼠分別給予相應(yīng)的麻醉劑量，采用腹腔注射麻醉，于每次麻

7、醉后進行ABR測試。觀察指標(biāo)：1)麻醉指標(biāo)：體質(zhì)量、誘導(dǎo)時間、維持時間、麻醉前及維持期呼吸頻率，2)聽力指標(biāo)：雙耳ABR反應(yīng)閾、各波潛伏期及波間期，3)記錄每次麻醉后各組豚鼠死亡例數(shù)。 1.2豚鼠鼓室解剖研究選定5只(10耳)豚鼠。予1％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉后，行耳后切口，分離皮下、顳肌，充分暴露顳骨，逐層解剖、測量各指標(biāo)并照相。測量后處死豚鼠，取出顳骨，測量離體鐙骨各指標(biāo)。測量指標(biāo)：1)活體指標(biāo)：砧鐙關(guān)節(jié)與

8、面神經(jīng)管前緣、砧鐙關(guān)節(jié)與圓窗龕上緣、鐙骨頭下緣與錐隆起、面神經(jīng)管前緣與圓窗龕上緣、前庭窗下緣與圓窗上緣、面神經(jīng)管上緣與水平半規(guī)管下緣之間的垂直距離；2)離體聽骨指標(biāo)：鐙骨高度(鐙骨頭上緣與足板間的距離)、足板邊緣及中央部厚度、足板長徑及短徑。 1.3豚鼠鐙骨切除術(shù)的模型建立5只(10耳)豚鼠隨機編號，左耳作為手術(shù)耳，右耳為空白對照耳。1％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射豚鼠麻醉后，耳后切口，分離皮下、顳肌，充分暴露顳骨，聽泡

9、入路，切斷面神經(jīng)，暴露砧鐙關(guān)節(jié)、鐙骨足板和卵圓窗，取出鐙骨，顳肌筋膜封閉卵圓窗，植入自制Teflon小柱作為人工鐙骨。觀察指標(biāo)：1)術(shù)中豚鼠麻醉狀態(tài)；2)手術(shù)時間；3)電鉆使用總時間；4)術(shù)后眩暈發(fā)生率；5)術(shù)后死亡例數(shù)：觀察、記錄術(shù)后3天內(nèi)各組豚鼠死亡例數(shù)；6)眼部感染情況。 2鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽力的影響按隨機數(shù)字法將24只(48耳)豚鼠分為兩組、每組12只。選定左耳為手術(shù)耳，分別進行暴露砧鐙關(guān)節(jié)手術(shù)(1組)，鐙骨切除、人工鐙

10、骨植入術(shù)(2組)，每組豚鼠分別依次編號；進行ABR測試；分別于術(shù)后1小時、術(shù)后1天各組中隨機抽出4只豚鼠，在ABR測試結(jié)束后斷頭處死，取出左側(cè)顳骨，其中，2耳行耳蝸中軸切片，2耳行掃描電鏡檢查。觀察指標(biāo)：1)聽力指標(biāo)：ABR反應(yīng)閾(以波Ⅱ為判斷指標(biāo))、各波潛伏期及波間期；2)耳蝸中軸切片指標(biāo)：觀察耳蝸螺旋管內(nèi)螺旋神經(jīng)節(jié)細胞的形態(tài)及數(shù)量；3)耳蝸掃描電鏡指標(biāo)：觀察耳蝸毛細胞、支持細胞形態(tài)。 3足板小孔開窗與鐙骨全切除術(shù)的臨床療效分

11、析將患耳按術(shù)式分為兩組：鐙骨全切除術(shù)組(TF組)43耳，足板小孔開窗術(shù)組(SF組)30耳。分析指標(biāo)：1)言語平均純音聽閾(言語PTA)；2)1000、2000和4000Hz的均值作為高頻平均純音聽閾(高頻PTA)；3)術(shù)后聽力損失(SNHL)；4)術(shù)后氣骨導(dǎo)差分布；5)術(shù)后眩暈反應(yīng)。 (三)統(tǒng)計學(xué)處理方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計分析。兩組均數(shù)比較用獨立樣本t-test，各組內(nèi)均數(shù)比較用配對t-test，；多組間

12、均數(shù)比較用oneway-ANOVA,多重比較：方差齊性用LSD法，方差不齊用Dunnett'sT3；兩組率的比較用χ2檢驗；等級資料的比較分析用非參數(shù)的秩和檢驗(Mann-WhitneyTest)；不同時間重復(fù)測量指標(biāo)比較用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析；不同時間各組均數(shù)比較用完全隨機設(shè)計的22析因設(shè)計分析。所有統(tǒng)計分析均為雙側(cè)檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。 [結(jié)論] 1.對豚鼠腹腔注射1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)可以達

13、到較理想的麻醉效果，而且可以重復(fù)麻醉至少三次，均不影響作為實驗評價指標(biāo)的ABR測試結(jié)果。因此，對進行鐙骨切除術(shù)對豚鼠聽力影響的實驗研究而言，1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)腹腔注射麻醉豚鼠是最佳的劑量。 2.豚鼠具有與人耳類似的鼓室結(jié)構(gòu)，打開聽泡即可暴露砧鐙關(guān)節(jié)、鐙骨足板，磨除面神經(jīng)管可充分暴露鐙骨足板及卵圓窗；聽骨小，鐙骨與周圍重要結(jié)構(gòu)之間的空間狹小，在進行鐙骨切除術(shù)時必須謹(jǐn)慎操作，選擇更精細的顯微器械。 3.用1％戊

14、巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉豚鼠，采取耳后切口聽泡入路、Teflon小柱(長1.4mm、直經(jīng)0.5mm)作為人工鐙骨、顳肌筋膜封閉卵圓窗、磨除面神經(jīng)管同時切斷面神經(jīng)，控制使用電鉆時間不超過60分鐘、間斷短時操作，術(shù)中謹(jǐn)慎操作，避免損傷半規(guī)管、圓窗，對術(shù)側(cè)眼予眼瞼縫合術(shù)，術(shù)后常規(guī)使用氯霉素預(yù)防感染，即可建立一個理想的鐙骨切除術(shù)豚鼠模型。 4.鐙骨切除術(shù)可引起豚鼠聽力的輕度損失，對耳蝸功能的影響小。引起聽力損失的主要原因在