抗MRSA菌株B2的鑒定及其抗菌蛋白的性質(zhì)研究.pdf

1、當(dāng)今，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗性不斷加強(qiáng)，臨床上可供選擇的藥物越來(lái)越少，MRSA已成為難以治療的“超級(jí)細(xì)菌”，極大地危害著人類的健康，迫使人們必須不斷去尋找新的藥物。本研究中，所用的這株指示菌MRSA就具有多重耐藥性，實(shí)驗(yàn)表明它對(duì)硫酸卡那霉素(Kanamycin Sulfate)、氨芐青霉素(Ampiciuin)，氯霉素(Chloramphenicol)、紅霉素(Erythromycin)、羧芐青霉素(Carbenici

2、llin)、鏈霉素(Streptomycin)、四環(huán)素(Tettacycline)、硫酸慶大霉素(Gentamycin Sulfate)、萘啶酮酸(Nalidixic Acid)等九種抗生素在不同濃度下均具有顯著的耐藥性。 本實(shí)驗(yàn)室分離到一株具有抑制MRSA生長(zhǎng)活性的菌株B2，通過(guò)傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)、生理生化鑒定，發(fā)現(xiàn)它與芽孢桿菌特征相符，基于16S-rDNA的進(jìn)一步分析表明，B2菌株與枯草芽孢桿菌有高度同源性，故鑒定為枯草芽孢桿菌B

3、2。通過(guò)對(duì)B2菌株培養(yǎng)條件的研究表明：此菌株在4℃-37℃、pH 2.0-11.0、NaCl濃度為1﹪-6﹪、以葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉為碳源時(shí)都能生長(zhǎng)，其最適生長(zhǎng)溫度為28℃，最適pH為7.0，最適NaCl濃度為1﹪，最適生長(zhǎng)碳源為麥芽糖。對(duì)B2菌株在不同培養(yǎng)條件下產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的研究，表明：當(dāng)pH為5.0、溫度為28℃，以麥芽糖作唯一碳源時(shí)，產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)活性最強(qiáng)。鑒于以上結(jié)果，確定既適合B2菌株生長(zhǎng)又能產(chǎn)生較強(qiáng)活性物質(zhì)的培養(yǎng)

4、條件。進(jìn)一步研究表明：B2菌株在28℃，170 rpm振蕩培養(yǎng)72 h后獲得的發(fā)酵液，經(jīng)高速離心徹底去除菌體及殘?jiān)螅锨逡涸?0﹪飽和度的硫酸銨下進(jìn)行鹽析時(shí)，可獲得粗提拮抗物質(zhì)。進(jìn)而對(duì)拮抗物質(zhì)性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)：該粗提物具有極強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，在100℃內(nèi)活性隨著溫度的升高而增強(qiáng)，121℃加熱20分鐘活性保持不變；其作用的活性pH范圍較廣，可以從2.0到12.0，但是酸性條件下的活性比堿性條件下的強(qiáng)；對(duì)蛋白酶K和氯仿極其敏感，在不同時(shí)間照射下