生防細菌W1的種類鑒定及其抗菌蛋白的分離純化與性質研究.pdf

1、W1是一株從揚州農田土壤中分離獲得的生防細菌，其能產生抗菌蛋白，對植物病原菌有較好的拮抗作用。為了進一步研究利用該生防細菌，本論文對細菌的分類地位、抗菌蛋白分離純化方法、抗菌蛋白理化性質以及抑菌特性進行了初步研究。 對生防細菌W1進行了16S rDNA序列分析，結果顯示該菌與解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amvloliquefaciens)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、莫哈韋芽孢桿菌(Bacillus

2、 mojavensis)、地衣芽孢桿菌(Bacillus lichenifrmis)和Bacillus velezensis五個種細菌的序列有較高的同源性，同源性分別為100％、99％、99％、98％和98％。W1菌株的表型特征為具有好氧性，能液化明膠，這些特征與枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌類似。根據(jù)16S rDNA序列的相似性與生物學性狀比較，W1菌株與解淀粉芽孢桿菌較為接近，因此初步將其定為解淀粉芽孢桿菌。 W1菌株培養(yǎng)濾液

3、中的抗菌蛋白可以30％硫酸銨完全沉淀，沉淀物經(jīng)透析后得粗蛋白。粗蛋白經(jīng)Sepharose Fast Flow離子交換柱層析在280nm處有四個吸收峰，其中峰D對供試病菌(棉花枯萎病菌．Fsarium oxysporum f.sp.vasinfectum)具有明顯的抑菌活性，且含量最高，其余峰均無抑菌活性。收集的峰D物質再經(jīng)SephadexG-75凝膠柱層析在280nm．處有三個吸收峰，其中只有峰D-1具抑菌活性，含量最高。收集峰D-1即

4、為精蛋白。對精蛋白進行SDS-PAGE，僅出現(xiàn)一條蛋白帶。這表明用以上方法可以從W1培養(yǎng)濾液中提取到較純的抗菌蛋白。 經(jīng)理化測定，生防細菌W1抗菌蛋白分子量為40,856Da，等電點為6.56；該蛋白中含有脯氨酸或羥脯氨酸，沒有苯環(huán)結構，不含有脂基，但含糖基，含糖量達35.0％。 提取的抗菌蛋白對棉花枯萎病菌具有明顯的破壞菌絲形態(tài)和抑制生長的作用。對菌絲形態(tài)的破壞作用主要表現(xiàn)為菌絲原生質收縮、菌絲細胞膨大成泡囊狀、細胞壁