Melphalan聯(lián)合腫瘤特異性的CD4+T細胞過繼治療獲得更強的抗腫瘤效應.pdf

1、目的：化療是許多惡性腫瘤的主要治療方法之一。化療藥物雖然通過各種不同的機制作用發(fā)揮抗腫瘤作用，但它們長期以來被認為是抑制機體的免疫應答。近年來的研究表明許多抗腫瘤藥物具有調(diào)節(jié)免疫應答的作用，這為化療和免疫治療聯(lián)合應用提供了理論支持。目前腫瘤的免疫治療已成為繼外科手術(shù)、放療、化療之后第四類已被證明具有顯著臨床治療效果及優(yōu)勢的抗腫瘤療法。CTX與過繼細胞治療（ACT)聯(lián)合治療時能顯著增強CD4+T細胞的抗腫瘤免疫應答作用并能引起小鼠已建立的

2、腫瘤消退。本研究擬通過對一些常用化療藥物的篩查來開發(fā)更多的具有類似CTX作用的化療藥物，并探討其作用機理，從而為臨床上設計和完成更有效的化療聯(lián)合免疫治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：用動物模型試驗，將苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他濱、阿霉素和馬法蘭等化療藥物分別與能特異性識別腫瘤的CD4+T細胞過繼治療聯(lián)合應用，通過流式細胞術(shù)來篩選出能增強腫瘤特異性的CD4+T細胞抗腫瘤免疫應答的化療藥物。然后通過動物實驗分

3、析篩選出的藥物對腫瘤微環(huán)境中各種不同的免疫細胞和細胞因子的影響；分析其對內(nèi)源性T淋巴細胞的效應；通過體外培養(yǎng)腫瘤細胞分析該篩選出的藥物是否能引起CRT的膜轉(zhuǎn)位和釋放HMGB1至胞外；觀察在不同的動物模型中篩選出的藥物聯(lián)合CD4+T細胞過繼治療的療效。
　　結(jié)果：通過對幾種常用化療藥物苯丁酸氮芥、替莫唑胺、卡莫司汀、紫杉醇、吉西他濱、阿霉素和馬法蘭等的篩查，發(fā)現(xiàn)僅Melphalan和 CTX—樣能有效逆轉(zhuǎn)這種變異的CD4+T細胞應答

4、，促進腫瘤特異性的CD4+T細胞大量擴增和向有利的效應細胞分化。Melphalan能引起腫瘤微環(huán)境中免疫細胞的動態(tài)變化，可引起一過性的淋巴細胞缺乏。通過對細胞因子的分析，發(fā)現(xiàn)Melphalan可誘導產(chǎn)生炎性細胞因子的微環(huán)境。此外，Melphalan還能促進腫瘤細胞發(fā)生CRT的膜轉(zhuǎn)位和釋放HMGB1，即能使腫瘤細胞發(fā)生免疫原性細胞死亡。Melphalan還能激活宿主內(nèi)源性CD8+T細胞。在A20HA和CT26HA兩種皮下種植瘤小鼠模型中，