轉(zhuǎn)Bt基因植物花粉對意大利蜜蜂影響的研究.pdf

1、目前國際上紛紛開展了轉(zhuǎn)抗蟲基因植物花粉對非靶標昆蟲特別是對有益昆蟲如蜜蜂、瓢蟲、草蛉等影響的研究，但多針對昆蟲發(fā)育和行為研究，針對影響機理研究尚不多見。本試驗通過飼喂意大利蜜蜂幼蟲轉(zhuǎn)Bt-Cry1Ab玉米、Bt-Cry1Ac棉花花粉，觀察幼蟲的生長發(fā)育情況，測定體內(nèi)一些解毒酶、蛋白酶活性變化，并分離了意蜂、棉鈴蟲中腸BBMV(BrushBorderMembranceVesicles)，進行結(jié)合動力學研究，主要結(jié)果如下： 取食Bt

2、花粉的蜜蜂與取食非Bt花粉的意蜂相比，幼蟲和蛹的發(fā)育歷期差異沒有達到顯著水平，其4日齡、5日齡和6日齡幼蟲的體重也沒有明顯差別。體內(nèi)酶活性方面，取食Bt玉米、棉花花粉蜜蜂6日齡幼蟲體內(nèi)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性、總蛋白酶活性處理組和對照組差異不顯著。而α-乙酸萘酯酶、乙酰膽堿酯酶、強、弱堿性類胰蛋白酶和類胰凝乳蛋白酶活性，處理組和對照組均有明顯差異。通過Elisa方法檢測，發(fā)現(xiàn)取食Bt玉米花粉的蜜蜂6日齡幼蟲體內(nèi)能夠檢測Cry1Ab殺蟲蛋

3、白，取食Bt棉花花粉的蜜蜂6日齡幼蟲體內(nèi)能夠檢測Cry1Ac殺蟲蛋白。 利用差速離心法，分離了意蜂、敏感品系棉鈴蟲BBMV。通過SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)：在53kDa～116kDa之間，意蜂存在5條比較明顯的條帶，其大小約為50、55、65、70、100kDa；而棉鈴蟲在這區(qū)間內(nèi)只在68kDa處有一條比較明顯的條帶。在116kDa～212kDa之間，可以發(fā)現(xiàn)意蜂在130、160、180kDa處有三條蛋白條帶；而棉鈴蟲在116kD

4、a～170kDa之間存在多條連續(xù)的蛋白條帶，在210kDa處有一條比較明顯的條帶。 利用125I標記二種Bt蛋白(Cry1Ac、Cry2Ab)，分別與意蜂、棉鈴蟲中腸BBMV進行體外標記結(jié)合試驗。結(jié)果顯示：蜜蜂與Cry1Ac的親和性常數(shù)Kd值高于棉鈴蟲(約為5倍)，說明意蜂與Cry1Ac親和力低于棉鈴蟲，且其結(jié)合位點濃度Rt值低于棉鈴蟲(＞2倍)；意蜂與Cry2Ab的親和性常數(shù)Kd值遠高于棉鈴蟲品系(約為18倍)，說明意蜂與Cr