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文檔簡介
1、目的:通過建立二甲肼(DMH)誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌大鼠模型,研究不同濃度的肌醇六磷酸(Inositol hexaphosphate,IP6)對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及其轉(zhuǎn)移的抑制作用。探討IP6對(duì)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)以及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的作用機(jī)制。
方法:將60只雄性Wistar大鼠按體重隨機(jī)分為五組,每組12只,分別為:對(duì)照組(CG)、模型組(DG)、IP6低劑量組(LG)、IP6中劑量組(MG)、IP6
2、高劑量組(HG)。每日以0.25g/kg、0.5g/kg、1.0 g/kg不同劑量的植酸鈉對(duì)IP6低、中、高劑量組大鼠進(jìn)行灌胃,對(duì)照組和模型組以同體積的生理鹽水灌胃。喂養(yǎng)一個(gè)月后,模型組及IP6低、中、高劑量組大鼠,每周一次頸背部皮下注射30mg/kg DMH,對(duì)照組注射生理鹽水,一共注射18周。后繼續(xù)喂養(yǎng)16周直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。HE染色方法觀察組織病理學(xué)形態(tài)。實(shí)時(shí)定量 PCR方法檢測(cè) E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、轉(zhuǎn)化生長因子β(
3、TGF-β)、血管生成因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子(MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2)mRNA的表達(dá)。Western-blot方法檢測(cè)E-cadherin、TGF-β、VEGF、MMP-9的蛋白水平表達(dá)。
結(jié)果:對(duì)照組、模型組及IP6低、中、高劑量組腫瘤發(fā)生率為:0%、100%、100%、88.9%、66.7%,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為:0%、62.5%、40%、25%、16.67%。共發(fā)現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移3例:
4、模型組2例,IP6低劑量1例;隨IP6劑量的增高E-cadherin mRNA與蛋白的表達(dá)量升高,與其他組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);隨IP6劑量的增高TGF-β、VEGF mRNA表達(dá)下降(P<0.05),與模型組相比,IP6低中高各組TGF-β表達(dá)下降(P<0.05),中高劑量組VEGF表達(dá)降低(P<0.05),TGF-β、VEGF蛋白結(jié)果與 mRNA結(jié)果相似,IP6低中高各組VEGF的表達(dá)量與模型組相比下降均有差異(P<
5、0.05);隨IP6劑量的增高M(jìn)MP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表達(dá)下降(P<0.05),與模型組相比,IP6低中高各組TIMP-1表達(dá)下降(P<0.05),IP6中高劑量組MMP-2、MMP-9與TIMP-2表達(dá)相繼下降(P<0.05);MMP-9蛋白結(jié)果與mRNA結(jié)果相似,IP6低中高各組 MMP-9的表達(dá)量與模型組相比下降均有差異(P<0.05)。
結(jié)論:IP6對(duì) DMH誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌發(fā)生有抑制
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