DHPO對(duì)慢性鋁染毒動(dòng)物保護(hù)作用的機(jī)理研究.pdf

1、[目的]鋁在環(huán)境中的廣泛存在和在日常生活中的廣泛應(yīng)用使人們接觸鋁的機(jī)會(huì)大大增加。我國(guó)正常人攝鋁主要來(lái)源于食品添加劑、含鋁藥物和鋁制品等，鋁暴露的問(wèn)題比較嚴(yán)重且未引起足夠重視。研究表明，鋁過(guò)多進(jìn)入體內(nèi)會(huì)對(duì)人體健康造成危害。鋁是一種慢性蓄積性神經(jīng)毒素，鋁在Alzheimer型老年性癡呆(AD)、透析性癡呆(Dialysis Encephalopathy，DE)等疾病中發(fā)揮的毒作用也已得到許多學(xué)者的肯定。目前已證明，鋁是DE肯定的、唯一的致病

2、因子。職業(yè)暴露的鋁作業(yè)工人出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能性改變。目前臨床上對(duì)于鋁負(fù)荷過(guò)多引起的疾病傾向于使用鋁螯合劑。本研究把DHPO(1，2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮)作為一種新型鋁螯合劑進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，主要從DHPO對(duì)鋁染毒動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的改善情況、對(duì)肝、腎、腦組織的保護(hù)作用和海馬區(qū)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)的影響，來(lái)評(píng)價(jià)DHPO對(duì)動(dòng)物神經(jīng)元以及學(xué)習(xí)行為的保護(hù)作用。同時(shí)通過(guò)測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)鋁和其它必需元素含量對(duì)DHPO排鋁作用和體內(nèi)其

3、它必需元素的影響等方面進(jìn)行探討，為尋找一種安全有效的排鋁藥物提供依據(jù)。 [方法] 1.DHPO的合成 2-甲基-3-羥基-4-吡喃酮與甲胺水溶液于95～100℃加熱回流，得到白色結(jié)晶即DHPO。 2.DHPO對(duì)鋁染毒小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響 健康昆明種小鼠98只，雌雄各半，22～24g，自由飲水和進(jìn)食。按體重隨機(jī)分為7組，以灌胃方式給藥，分組情況如下：陰性對(duì)照組，預(yù)防組，低劑量組，中劑量組，

4、高劑量組，染毒組，腦復(fù)新對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前兩天用跳臺(tái)儀對(duì)小鼠進(jìn)行跳臺(tái)訓(xùn)練，24h后進(jìn)行測(cè)試，記錄小鼠跳臺(tái)潛伏期和5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)。 3．DHPO對(duì)鋁染毒小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用：給藥結(jié)束后，小鼠心臟灌注進(jìn)行固定，取海馬組織，用免疫組織化學(xué)進(jìn)行原位檢測(cè)海馬區(qū)Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)，檢測(cè)DHPO對(duì)鋁致細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 4．DHPO對(duì)鋁染毒小鼠排鋁作用的研究：將小鼠以頸椎脫臼法處死，取其血清、肝、腎、腦和骨骼組織。

5、濕法消化后用石墨爐原子吸收的方法分析小鼠血清中的鋁含量。 5．DHPO對(duì)鋁染毒小鼠其它有益元素的影響：取各組小鼠的肝、腎、股骨和腦組織消化后用原子吸收的方法分析小鼠各組織中的銅、鋅、鈣、鐵、鎂含量。 6．DHPO對(duì)鋁致肝臟、腎臟和海馬損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察：小鼠肝臟、腎臟和海馬蘇木素．伊紅染色(HE)染色，進(jìn)行病理學(xué)觀察，分析小鼠肝、腎臟和海馬的形態(tài)學(xué)改變。 [結(jié)果] 1．DHPO的合成：結(jié)果表明：熔點(diǎn)、紅

6、外與核磁波譜符合目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)特征。 2．對(duì)鋁染毒小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響：小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)表明：與染毒組相比，預(yù)防組、中、高劑量組潛伏期顯著降低(P<0.05)，而低劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且各劑量組之間存在劑量效應(yīng)關(guān)系；各劑量組與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在錯(cuò)誤次數(shù)的比較中，預(yù)防組明顯低于染毒組(P<0.05)，低、中、高劑量組和腦復(fù)新對(duì)照組均低于染毒組但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組

7、相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3．DHPO對(duì)鋁染毒小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用：低劑量組、染毒組和腦復(fù)新對(duì)照組Bcl．2蛋白表達(dá)與陰性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，中、高劑量組和預(yù)防組均高于陰性對(duì)照組(P<0.05)；預(yù)防組、低、中、高劑量組均高于腦復(fù)新對(duì)照組(P<0.05)。染毒組、預(yù)防組、低劑量組Bax蛋白表達(dá)均高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，中、高劑量組、腦復(fù)新對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；染

8、毒組、預(yù)防組和低劑量組高于腦復(fù)新對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組低于腦復(fù)新對(duì)照組(P<0.05)。 4．DHPO對(duì)鋁中毒小鼠排鋁作用研究：腦鋁和腎臟鋁中，預(yù)防組、低、中、高劑量組鋁含量均低于染毒組(P<0.05)，預(yù)防組、低、中劑量組高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組與陰性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肝臟鋁含量比較，預(yù)防組，低、中、高劑量均低于染毒組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。骨骼鋁含量比較，預(yù)防組，低、中、

9、高劑量均低于染毒組(P<0.05)，與陰性對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血清鋁比較，預(yù)防組、低、中、高劑量組均低于染毒組(P<0.05)，但高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，低中高劑量組之間存在劑量反應(yīng)關(guān)系。 5．DHPO對(duì)鋁中毒小鼠其它必需元素的影響：腦、肝臟、腎臟和骨骼中的鎂、鐵含量各組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腎、肝、骨組織各組鈣含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦鈣含量比較，低劑量組和染毒組均低于陰性對(duì)

10、照組(P<0.05)；預(yù)防組、中、高劑量組和陰性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦和肝臟中的鋅含量各組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腎臟鋅含量中劑量組高于其它各組(P<0.05)，其它各組之間兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。骨骼中預(yù)防組、低、中、高劑量組鋅含量與陰性對(duì)照組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，染毒組中的鋅含量明顯低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。腦銅、骨骼銅和肝臟銅含量比較各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

11、腎臟中低劑量組銅含量高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，染毒組低于陰性對(duì)照組(P<0.05)，其它與陰性對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 6．DHPO對(duì)鋁致肝臟、腎臟和海馬損傷的保護(hù)作用的形態(tài)學(xué)觀察：對(duì)組織切片光鏡下進(jìn)行觀察，染毒組肝臟、海馬和腎臟均有明顯損傷，用藥各組損傷的組織均有一定程度的恢復(fù)。 [結(jié)論] 1．DHPO能夠改善鋁染毒小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。 2．DHPO對(duì)鋁引起的凋亡相關(guān)蛋白改變有一定