海風(fēng)藤提取物對AD模型大鼠行為學(xué)影響的研究.pdf

1、研究背景：阿爾茨海默病(Alzheimer disease， AD)是一種以進行性認知功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其病理學(xué)特征是老年斑、神經(jīng)原纖維纏結(jié)及神經(jīng)元缺失。老年斑的主要成分是β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein， Aβ)。雖然AD的確切病因及具體機制還不明確，但廣泛認可的Aβ假說認為，Aβ主要由β淀粉樣蛋白前體蛋白(Aβ precursor protein， APP)水解而產(chǎn)生，在機體內(nèi)因代謝障礙而沉積在

2、海馬、基底核等部位，從而啟動了AD的發(fā)病過程，并在其發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用。許多研究認為Aβ1-42寡聚體是AD發(fā)病中的主要毒性形式，其比聚合態(tài)Aβ1-42具有更高的神經(jīng)毒性。本病認知缺陷的程度與腦內(nèi)寡聚體的水平相關(guān)，而不是與總的淀粉樣蛋白含量相關(guān)[1]。因此該實驗同時使用Aβ1-42寡聚體和聚合態(tài)Aβ1-42來誘導(dǎo)大鼠的認知功能障礙，并觀察兩者之間對大鼠行為學(xué)影響程度的不同。
　　 近些年來，已建立了多種較公認的AD動物模型，

3、然而現(xiàn)在還沒有一種動物模型能夠模擬AD患者所有的認知、行為、生化和組織病理學(xué)異常。使用微滲泵向側(cè)腦室內(nèi)持續(xù)灌注Aβ能夠部分模擬AD的病理表現(xiàn)，并且較好地解決了使大量Aβ彌散性分布到腦內(nèi)而不是在注射點局部聚集的問題，因而本實驗采用側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42方法建立AD研究的動物模型。
　　 海風(fēng)藤屬胡椒科胡椒屬植物，具有神經(jīng)保護和抗炎作用。很多文獻報道側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ后可以導(dǎo)致大鼠行為學(xué)改變，但海風(fēng)藤能否減輕這些改變尚不清楚，因

4、此將研究海風(fēng)藤是否能改善模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能作為本課題的立項出發(fā)點。通過側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42建立癡呆大鼠模型，采用水迷宮實驗觀察模型大鼠行為學(xué)改變以及海風(fēng)藤對其影響，為闡明AD發(fā)生機制及尋找干預(yù)措施提供依據(jù)，具有重要的理論意義和潛在的實用價值。
　　 目的：探討采用側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42方法致SD大鼠AD模型的建立；探討Aβ1-42寡聚體與聚合態(tài)Aβ1-42對大鼠行為學(xué)不同程度的影響；探討應(yīng)用海風(fēng)藤干預(yù)后大鼠行為學(xué)是否

5、發(fā)生變化。
　　 方法：60只SD大鼠隨機分為10組，采用微滲泵向左側(cè)側(cè)腦室持續(xù)灌注法制作動物模型。10組分別為：空白對照組（A組，不給于任何手術(shù)操作和干預(yù)）、假手術(shù)組（B組，只接受腦室內(nèi)置管等手術(shù)操作，不給于藥物）、聚合態(tài)Aβ組(C組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸造模)、聚合態(tài)Aβ+海風(fēng)藤提取物組（D組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸）、聚合態(tài)Aβ+DMSO組（E組，腦室內(nèi)灌注聚合態(tài)Aβ+乙腈和三氟乙酸）、乙腈和

6、三氟乙酸組（F組，腦室內(nèi)灌注乙腈和三氟乙酸，而不注射Aβ）、Aβ寡聚體組（G組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES造模）、Aβ寡聚體+海風(fēng)藤提取物組(H組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES)、Aβ寡聚體+DMSO組(I組，腦室內(nèi)灌注Aβ寡聚體+HDL和HEPES)、HDL和HEPES組（J組，腦室內(nèi)灌注HDL和HEPES，而不注射Aβ寡聚體）。術(shù)后D組和H組大鼠每天腹腔注射10％海風(fēng)藤提取物(含2.5％DMSO)，每100

7、g體重1ml，E組和I組大鼠每天腹腔注射2.5％DMSO，共5周。術(shù)后第31天起進行Morris水迷宮實驗，分為空間探索期和定向航行期?？臻g探索實驗時記錄逃避潛伏期，定向航行實驗時錄制實時視頻，并分析計算穿越平臺的次數(shù)，在平臺所在象限經(jīng)歷的時間比率和路程比率。
　　 結(jié)果：(1)水迷宮實驗空間探索期
　　 G組逃避潛伏期比C組延長(P＜0.05)，C組潛伏期比F組延長(P＜0.05)，G組潛伏期比J組延長(P＜0.05)

8、：D組比C組、E組逃避潛伏期縮短(P＜0.05)；H組比G組、I組逃避潛伏期縮短(P＜0.05)；A組、B組、F組和J組之間逃避潛伏期無明顯差別。
　　 (2)水迷宮實驗定向航行期
　　 G組穿越平臺的次數(shù)少于C組，時間比率和路程比率低于C組(P＜0.05)；C組穿越平臺的次數(shù)少于F組，時間比率和路徑比率低于F組(P＜0.05)；G組穿越平臺的次數(shù)少于J組，時間比率和路程比率低于J組(P＜0.05)；D組穿越平臺的次數(shù)多

9、于C組、E組，時間比率和路程比率高于C組、E組(P＜0.05)；H組穿越平臺的次數(shù)多于G組、I組，時間比率和路程比率高于G組、I組(P＜0.05)；A組、B組、F組和J組之間無明顯差別。
　　 結(jié)論：向一側(cè)側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42能建立AD動物模型；Aβ1-42寡聚體對大鼠行為學(xué)的影響較聚合態(tài)Aβ1-42對大鼠行為學(xué)的影響大；海風(fēng)藤干預(yù)能部分改善Aβ1-42組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 意義：本研究使用大腦立體定位技術(shù)