冷卻牛肉儲藏過程中腐敗菌多樣性研究.pdf

1、本論文采用克隆建庫法、PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳）法以及純培養(yǎng)的方法初步比較分析了相同銷售條件下的未包裝冷卻牛肉與保鮮膜包裝冷卻牛肉中的微生物群落結構。通過采用16SrDNA的V3區(qū)片段進行PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳），同時利用16SrDNA全長序列，通過克隆文庫技術對兩個樣品的微生物群落結構進行研究。與此同時利用常用純培養(yǎng)的方法，根據(jù)細菌的菌落形態(tài)、菌落顏色、革蘭氏染色等常見特征，從市售冷卻牛肉中，選取菌落形態(tài)差別比較

2、明顯的菌株進行研究。 通過分子克隆的方法研究發(fā)現(xiàn)：微生物群落結構表現(xiàn)出較大的差異。保鮮膜包裝冷卻牛肉共有6個OTU（Operational Taxonomic Unit），主要為Lactococcus（乳球菌屬，28％），Lactobacillus（乳桿菌屬，26％），Carnobacterium（肉品桿菌屬，18％）和Brochothrix（索絲菌屬，10％）；未包裝冷卻牛肉則共得到18個OTU，主要是Lactococcus（

3、乳球菌屬，28％），Brochothrix（索絲菌屬，18％），Acinetobacter（不動桿菌屬，11％）。結果表明，保鮮膜包裝對于葡萄球菌屬以及冷桿菌屬等一些細菌都起到了一定的抑制作用。 通過純培養(yǎng)的方法研究發(fā)現(xiàn)：從未包裝冷卻牛肉和保鮮膜包裝冷卻牛肉中挑選出差異較明顯的菌株共32株，其中保鮮膜包裝冷卻牛肉樣品共12株，未包裝冷卻牛肉樣品共20株；同時選取兩樣品中的優(yōu)勢菌株各4株進行進一步的研究（8株細菌編號為：S01-S

4、08，其中S01-S04為未包裝冷卻牛肉樣品：S05-S08位保鮮膜包裝冷卻牛肉樣品），通過ARDRA（AmplifiedribosomalDNArestrictionanalysis）以及16SrDNA序列等進行分類研究，確定該細菌的分類地位，并結合形態(tài)、常規(guī)生理生化特性進行鑒定，確定各細菌所屬種。實驗表明：S01為假單胞菌屬中的惡臭假單胞菌（Pseudomonas.putida），S02為希瓦氏菌屬下的（Shewanella.cin

5、ciasp.），而S03和S05為希瓦氏菌屬下的腐敗希瓦氏菌（Shewanella.putrefaciens），S04為窄食單胞菌屬中的嗜麥芽窄食單胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia），S06為嗜冷桿菌（Psychrobactersp.），S07為葡萄球菌屬中的松鼠葡萄球菌（Staphylococcus.sciuri），S08為微桿菌屬中的產(chǎn)左聚糖微桿菌（Microbacterium.laevaniforman