廣東省人群脂肪性肝病臨床和分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、本研究擬在廣東地區(qū)開展設(shè)計(jì)規(guī)范的大樣本流行病學(xué)調(diào)查，以填補(bǔ)FLD研究資料的空白。 胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)是非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。IR狀態(tài)下，胰島素對(duì)脂肪代謝的調(diào)節(jié)作用減弱，使血中游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)增加，肝細(xì)胞內(nèi)脂肪儲(chǔ)積沉著使肝細(xì)胞變性、腫大，形成脂肪肝；同時(shí)FFA可導(dǎo)

2、致脂質(zhì)過(guò)氧化，誘導(dǎo)細(xì)胞因子并導(dǎo)致線粒體功能障礙。 NAFLD患者體內(nèi)各種細(xì)胞因子的失衡導(dǎo)致IR，在NAFLD的發(fā)病過(guò)程中起關(guān)鍵作用。IR受免疫細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、脂聯(lián)素(Adiponectin，ADPN)、瘦素(Leptin，LEP)調(diào)節(jié)。NAFLD發(fā)生過(guò)程中，細(xì)胞因子的的失衡涉及相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控的改變，這些細(xì)胞因子的表達(dá)受基因多

3、態(tài)性調(diào)節(jié)。NAFLD患者基因組的變異(或多態(tài)性位點(diǎn))--單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)影響疾病的發(fā)生和發(fā)展。本研究旨在運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，與傳統(tǒng)的流行病學(xué)研究相結(jié)合，以確定廣東漢族人群NAFLD的發(fā)牛、分布、消長(zhǎng)和流行規(guī)律。研究目的1、調(diào)查廣東省漢族普通人群FLD的患病率及其主要危險(xiǎn)因素。 2、運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，與傳統(tǒng)的流行病學(xué)研究相結(jié)合，研究NAFLD相關(guān)細(xì)胞因子TNF

4、-α、ADPN、LEP基因的多態(tài)性與NAFLD的關(guān)系，以了解廣東漢族人群NAFLD的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。 研究對(duì)象與方法(一)研究實(shí)驗(yàn)方法1、臨床流行病學(xué)調(diào)查方法：廣東省年齡大于7歲的常住居民，采用多階段分層隨機(jī)整群抽樣方法，抽取廣東省廣州市人群1436人，同時(shí)抽取了廣東省北部的韶關(guān)市南郊金沙小區(qū)719人、東部的惠州市河南岸區(qū)1037人、西部的湛江市調(diào)順村351人，共計(jì)3543人。從2005年4月到2005年11月分別對(duì)上述地區(qū)進(jìn)

5、行調(diào)查。調(diào)查內(nèi)容包括一般情況、健康相關(guān)行為特別是飲酒和飲食狀況、疾病史和體檢項(xiàng)目；腹部實(shí)時(shí)B超檢查；全部脂肪肝患者及配對(duì)調(diào)查對(duì)象行生化檢查(肝功能、血糖、血脂、血清胰島素水平、肝炎標(biāo)志物等)。 2、ADPN、TNF-α及LEP基因多態(tài)性檢測(cè)：按流行病學(xué)調(diào)查方法在人群中隨機(jī)抽取，所選病例按中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)會(huì)關(guān)于非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)(即臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查、和B超為主，必要時(shí)活檢)，分為NAFLD組(107例)和對(duì)照組(105例

6、)，記錄身體各項(xiàng)測(cè)量參數(shù)，進(jìn)行常規(guī)生化、血脂、病毒性肝炎血清標(biāo)記物、測(cè)空腹血糖、空腹胰島素等檢查，IR采用HOMA穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估。抽取靜脈血，采用定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法定量檢測(cè)標(biāo)本中血漿ADPN、TNF-α和LEP水平，用DNA試劑盒提取基因組DNA，采用PCR-RFLP法檢測(cè)ADPN外顯子基因型、TNF-α啟動(dòng)子區(qū)基因型和LEP肩動(dòng)子區(qū)基因型。 (二)統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS13.0進(jìn)行單因素分析和多因素非條件Logi

7、stic回歸分析。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。暴露率比較和多元回歸分析判斷危險(xiǎn)因素。 研究結(jié)論①?gòu)V東省FLD患病率(17.2％)較高，以NAFLD(15.0％)為主，ALD和疑似ALD(0.4％和1.8％)患病率低。FLD患病率隨著年齡的升高有升高的趨勢(shì)。50歲以前男性的患病率高于女性，50歲后女性患病率高于男性。 ②廣東省兒童青少年(7-18歲)FLD患者均為NAFLD，其患病率(1.3％)遠(yuǎn)低于成人(18歲以上)F

8、LD患病率(19.1％)。鄉(xiāng)村地區(qū)脂肪肝的患病率為12.9％，明顯低于城鎮(zhèn)地區(qū)23％，這種差異豐要是由NAFLD所引起的。 ③IR及其相關(guān)的細(xì)胞因子失衡與FLD的關(guān)系密切。體重指數(shù)、腰圍、腰臀比、血清甘油三脂、空腹血糖、高血壓低、ADPN、TNF-α、LEP水平等指標(biāo)與FLD有關(guān)。ADPN、TNF-α、LEP與IR有密切關(guān)系，其中ADPN與TNF-α相互作用，失衡后導(dǎo)致NAFLD。 ④ADPN基因外顯子2的T45G、TN

9、F-α基因啟動(dòng)子區(qū)-308、-238位點(diǎn)G→A多態(tài)性、LEP基因啟動(dòng)子區(qū)-2548位點(diǎn)A→G多態(tài)性在我國(guó)廣東地區(qū)漢族人群中存在。 ⑤中國(guó)廣東漢族人TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)．238位點(diǎn)G→A變異NAFLD的發(fā)生有關(guān)，A等位基因可能通過(guò)增加TNF-α表達(dá)參與IR。TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)-308位點(diǎn)G→A變異與NAFLD的發(fā)生無(wú)關(guān)。 ⑥中國(guó)廣東漢族人群ADPN基因外顯子2的T45G多態(tài)性與NAFLD相關(guān)，G等位基因可能通過(guò)增加T