油菜赤霉素代謝關鍵酶基因的分離及其功能分析.pdf

1、本文旨在分離甘藍型油菜中赤霉素代謝關鍵酶的基因，并對其功能進行分析，為探索赤霉素代謝關鍵酶基因及其表達調控在雜種優(yōu)勢形成中的分子機理奠定基礎，同時對油菜的遺傳轉化體系進行了優(yōu)化，獲得以下主要結果： 1.利用擬南芥赤霉素代謝關鍵酶基因的序列在Genbank中尋找油菜中相應基因的ESTs(expression sequence tags，ESTs)序列并進行拼接，設計引物利用PCR技術從油菜(Brassica napus)cDNA或

2、基因組中分離了赤霉素代謝關鍵酶基因BnGA30x1，BnGA30x2和BnGA200x1。序列分析表明，BnGA30xJ全長1648bp，推測含有一561bp的內含子，編碼358個氨基酸：BnGA30x2 ORF為1077bp,編碼358個氨基酸；BnGA200x1 ORF為1134bp,編碼377個氨基酸。與擬南芥相應基因所編碼的氨基酸的同源性分別達到81.6％，87.6％和81.7％。 2.構建了35S啟動子驅動的植物過表達

3、載體pBnGA30x1，pBnGA30x2，pBnGA200x 1和RNPd表達載體pBnGA30x2RNAi,pBnGA200x1RNAi。 3.利用葉盤法將BnGA30x1,BnGA30x2和BnGA200x1分別轉入煙草，轉基因煙草表現(xiàn)出生長速度快，生物產(chǎn)量高，花期提早等典型的赤霉素生理作用的性狀。Northern blottig表明，轉基因在煙草體內獲得了過量表達。通過赤霉素GA<,3>含量測定，轉基因植株分別比對照增加

4、31.9％，17.7％和28.1％。 4.以甘藍型油菜“中雙九號”的子葉柄為外植體，利用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化體系，獲得了經(jīng)pBnGA30x1，pBnGA200x1和pBnGA200x1RNAi轉化的油菜植株，分別是16株，17株和2株。通過對外植體愈傷的形成和分化、抗性芽生成及植株再生的狀況的觀察，“中雙九號”適于作為遺傳轉化的受體。 5.本研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的卡那霉素對油菜外植體愈傷的形成和芽的分化具有明顯的抑制作用且不