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文檔簡介
1、背景:近來,有報道經(jīng)尾靜脈移植間充質(zhì)干細胞(MSCs)治療早期帕金森?。≒D)大鼠和小鼠可明顯改善其異常行為。臨床上PD患者就診時已處于疾病中、晚期,并且藥物和外科治療可有效控制中期 PD患者的癥狀,因此,MSCs治療PD的主要群體偏向于晚期PD患者。經(jīng)外周靜脈移植MSCs治療晚期PD鮮見研究,為了更加貼近于臨床,我們認為MSCs移植治療晚期PD,值得我們研究。
目的:研究人臍帶間充質(zhì)干細胞(hUC-MSCs)的生物學特性及評
2、估經(jīng)外周靜脈行hUC-MSCs移植治療晚期PD大鼠的療效,為臨床hUC-MSCs移植治療PD提供實驗基礎(chǔ)。
方法:
1.從人臍帶和大鼠骨髓中分離培養(yǎng)間充質(zhì)細胞,通過流式細胞術(shù)檢測細胞表面抗原,以及成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化實驗,鑒定分離培養(yǎng)的細胞是否為MSCs;利用免疫細胞化學法和Western Blot法檢測hUC-MSCs及大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(rBM-MSCs)的神經(jīng)細胞標志表達情況;
2.用6-OH
3、DA立體定位損毀S D大鼠右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束,以阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為、免疫組化檢測黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維數(shù)量作為晚期PD大鼠模型的評價指標;
3.造模后第3周將PD大鼠隨機分為三組:對照組(經(jīng)尾靜脈輸注1 ml M199培養(yǎng)液)、hUC-MSCs治療組(經(jīng)尾靜脈輸注6 x106 hUC-MSCs)和rBM-MSCs治療組(經(jīng)尾靜脈輸注6 x106 rBM-MSCs);MSCs移植后第2、4、8、12周檢測PD
4、大鼠旋轉(zhuǎn)行為的變化,MSCs移植后第12周免疫組化法檢測大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維數(shù)量的變化,評估hUC-MSCs的療效。
結(jié)果:
1.人臍帶間充質(zhì)細胞強表達CD90、CD29、CD73、CD105,弱表達CD106,不表達CD45、CD34及HLA-DR,能夠分化為脂肪細胞、骨細胞和軟骨細胞;表明我們成功分離了hUC-MSCs;
2.大鼠骨髓間充質(zhì)細胞表達CD29、CD9,不表達CD4
5、5、CD34,能夠分化為脂肪細胞、骨細胞和軟骨細胞;表明我們成功分離了rBM-MSCs;
3.hUC-MSCs和rBM-MSCs均表達神經(jīng)干細胞標記Nestin、神經(jīng)細胞標記NSE及星形膠質(zhì)細胞標記GFAP,不表達多巴胺能神經(jīng)元標記TH,表明MSCs可能具有向神經(jīng)細胞方向分化的潛能;
4.造模后第3周手術(shù)組大鼠的旋轉(zhuǎn)行為大于6圈/分,黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維損毀90%以上,符合晚期PD大鼠模型標準;
6、
5.MSCs移植后第2、4、8、12周PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為無改善;
6.MSCs移植后第12周P D大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維損傷情況無改善。
結(jié)論:
1.hUC-MSCs表面帶有神經(jīng)干細胞標記Nestin、神經(jīng)細胞標記NSE,可能具有向神經(jīng)細胞方向分化的潛能;
2.經(jīng)外周靜脈移植hUC-MSCs治療晚期PD大鼠無效,建議及早治療或經(jīng)其他途徑行hUC-MSCs移植
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