扇貝裙邊糖胺聚糖對巨噬細胞脂蛋白代謝及脂蛋白受體表達的影響研究.pdf

1、目的：研究扇貝裙邊提取物—糖胺聚糖(SS-GAG)對巨噬細胞脂蛋白受體及脂蛋白氧化功能的影響，探討SS-GAG的抗動脈粥樣硬化(AS)的分子機制。 方法：1.采用小鼠的單核巨噬細胞株(RAW264.7)，建立氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)誘導的巨噬細胞損傷模型，運用MTT比色分析法研究SS-GAG對巨噬細胞的毒性作用及細胞氧化損傷后增殖活性的影響。 2.以體外培養(yǎng)的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7為模型，通過黃嘌呤氧化

2、酶法、硫代巴比妥酸顯色法等多種生化的方法觀察SS-GAG對巨噬細胞氧化低密度脂蛋白(LDL)過程中的產(chǎn)物丙二醛(MDA)和共軛雙烯、髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的影響。 3.以體外培養(yǎng)的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7為模型，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組織化學的方法檢測SS-GAG對OX-LDL損傷的巨噬細胞的低密度脂蛋白受體(LDL-R)蛋白表達和基

3、因轉(zhuǎn)錄的影響。 4.以體外培養(yǎng)的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7為模型，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組化的方法檢測SS-GAG對OX-LDL損傷的巨噬細胞的高密度脂蛋白受體(SR-BI)蛋白表達和基因轉(zhuǎn)錄的影響。 5.以體外培養(yǎng)的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7為模型，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測SS-GAG對OX-LDL損傷的巨噬細胞的清道夫受體CD36基因轉(zhuǎn)錄的影響。 結(jié)果：1.

4、SS-GAG100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml藥物組巨噬細胞的增值活性與正常對照組比較無顯著差別(P＞0.05)，表明實驗所用濃度范圍內(nèi)SS-GAG對細胞無明顯的毒性反應。 2.OX-LDL50μg/ml與小鼠的單核巨噬細胞RAW264.7作用24小時后能明顯抑制RAW264.7細胞的增值活性。與模型組比較，SS-GAG各劑量組均可提高OX-LDL損傷引起的巨噬細胞增殖活性降低，以SS-GAG

5、400μg/ml組作用最強，藥物劑量小于400μg/ml時存在量效關(guān)系。 3.LDL與巨噬細胞孵育24h后，細胞內(nèi)的MPO活性升高、GSH-PX活性降低，脂質(zhì)過氧化物MDA和共軛雙烯的生成明顯增多；與模型組比較，扇貝糖胺聚糖在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml濃度時可明顯提高GSH-PX活性，降低MPO活性，降低脂質(zhì)過氧化物的生成，且存在一定的劑量效應關(guān)系。 4.0X-LDL50μg/ml與單核巨噬細胞

6、RAW264.7作用24小時后能降低LDL-R的蛋白表達和LDL-RmRNA表達。與模型組比較，SS-GAG在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml濃度時對于OX-LDL引起的LDL-R蛋白表達和基因轉(zhuǎn)錄的降低有上調(diào)作用，以200μg/ml組作用最強。 5.OX-LDL50μg/ml與單核巨噬細胞RAW264.7孵育24小時后能降低細胞的高密度脂蛋白受體SR-BI的蛋白和mRNA表達。與模型組比較，預先應用SS-G

7、AG(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的各組細胞的SR-BI表達均有不同程度的上調(diào)，以400μg/ml組作用最強，存在一定的量效關(guān)系。 6.經(jīng)OX-LDL50μg/ml損傷的巨噬細胞與正常對照組細胞比較，細胞的清道夫受體CD36mRNA表達明顯增多，而預先應用SS-GAG(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的各組細胞的CD36表達均有不同程度的下調(diào)，以400μg/ml組作用最強，存在一定