腦膠質(zhì)瘤中OPN、MMP-9和MVD的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其侵襲性強(qiáng)，術(shù)后復(fù)發(fā)快，是神經(jīng)外科最棘手的難治性腫瘤之一，目前為止臨床治療效果仍不盡人意。治療上的差異無(wú)疑是其重要的影響因素，但腫瘤內(nèi)在的生物學(xué)特性，特別是分子水平的差異才應(yīng)該是關(guān)鍵所在。
　　 近年來(lái)，通過(guò)對(duì)人腦膠質(zhì)瘤分子遺傳學(xué)的研究，人們已認(rèn)識(shí)到腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多步驟連續(xù)過(guò)程，涉及到粘附分子、酶類、細(xì)胞因子、基因調(diào)控、細(xì)胞周期進(jìn)展改變、信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常等多方面的因素。近年的

2、研究證實(shí)，骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種具有多種功能的細(xì)胞基質(zhì)蛋白，有助于多種腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，是一種新的腫瘤標(biāo)記物?；|(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）是降解細(xì)胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）的重要蛋白水解酶，ECM的降解一方面引起細(xì)胞外基質(zhì)這種屏障的破壞，使瘤細(xì)胞更容易向周圍組織侵襲，另一方面，有利于腫瘤內(nèi)新生血管的形成，故MMP-9

3、在膠質(zhì)瘤的侵襲過(guò)程中起著非常重要的作用。
　　 因此通過(guò)檢測(cè)OPN和MMP-9在正常腦組織、低級(jí)別和高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，探討OPN和MMP-9在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義，并同時(shí)檢測(cè)微血管密度（MVD）的表達(dá)情況了解前兩個(gè)指標(biāo)是否在促進(jìn)腫瘤血管增殖方面起到一定作用。
　　 方法：收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科2007年2月-2008年5月手術(shù)治療的50例膠質(zhì)瘤病人（其中男性31例，女性19例）的手術(shù)標(biāo)本，年齡

4、10-74歲，平均年齡46.66±16.85歲。按WHO（2000年）神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)明確病理診斷（分類和分級(jí)），其中Ⅰ級(jí)8例，Ⅱ級(jí)16例，Ⅲ級(jí)16例，Ⅳ級(jí)10例。另取因腦皮質(zhì)造瘺的正常腦組織8例作為對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。制成5微米切片以備免疫組化染色。
　　 免疫組化結(jié)果判定：每張切片在陽(yáng)性表達(dá)較高區(qū)隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野（×400），連續(xù)計(jì)數(shù)至少1000個(gè)腫瘤細(xì)胞。首先將染色強(qiáng)度分級(jí)打分：0分

5、為無(wú)色陰性，1分為淡黃色弱陽(yáng)性，2分為棕黃色中等陽(yáng)性，3分為棕褐色強(qiáng)陽(yáng)性。（染色深淺與背景著色相對(duì)比）。再將陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比打分：0分為陰性，1分為陽(yáng)性細(xì)胞≤10％，2分為11％-50％，3分為51％-75％，4分為>75％。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積>3分才算免疫反應(yīng)陽(yáng)性。
　　 計(jì)數(shù)微血管密度的方法：瘤組織內(nèi)陽(yáng)性著色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇計(jì)為1個(gè)陽(yáng)性血管標(biāo)記，每例觀察切片1張，避開(kāi)腫瘤壞死或出血區(qū)域，在低倍鏡（×

6、40）下選擇微血管最豐富區(qū)，即“熱點(diǎn)”（“hot spot”），在高倍視野（×200）下計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)5個(gè)200倍視野下的血管數(shù)，其算術(shù)平均數(shù)計(jì)為該例切片的MVD測(cè)定值。不同組別膠質(zhì)瘤的MVD用X±S表示。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：根據(jù)數(shù)據(jù)采集的不同方法及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的不同要求，選用單因素方差分析，x2檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)，t'檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

7、結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示OPN與MMP-9在50N腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)陽(yáng)性率分別為72.0％，66.0％，在正常腦組織中表達(dá)陽(yáng)性率分別為12.5％，0.0％。MVD在膠質(zhì)瘤組和正常腦組織中的表達(dá)均值分別為36.71±16.79、3.91±0.60。OPN、MMP-9、MVD在腫瘤組和正常腦組織組之間的差異顯著且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。OPN、MMP-9在高級(jí)別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級(jí)）中表達(dá)陽(yáng)性率分別為88.5％，84.6％，OPN、MMP-9在低

8、級(jí)別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級(jí)）中表達(dá)陽(yáng)性率分別為54.2％，45.8％，MVD在高級(jí)別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級(jí)）和低級(jí)別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級(jí)）中的表達(dá)均值分別為50.53±7.82，21.73±9.18，OPN、MMP-9、MVD在高級(jí)別腫瘤組（Ⅲ、Ⅳ級(jí)）和低級(jí)別腫瘤組（Ⅰ、Ⅱ級(jí)）之間的差異顯著且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。OPN、MMP-9表達(dá)陽(yáng)性腫瘤組的MVD值分別為42.82±14.07，44.19±12.74，表達(dá)陰性腫瘤組的MVD值分別為20

9、.98±12.65，22.18±14.10，兩者M(jìn)VD差異顯著（P<0.01）。在低級(jí)別組中，同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)OPN、MMP-9的MVD值為33.14±2.19，OPN、MMP-9只有一個(gè)陽(yáng)性表達(dá)的MVD值為15.62±0.84，OPN、MMP-9都陰性表達(dá)的MVD值為14.41±1.55，前者與后兩者相比差異有顯著性（P<0.01），后兩者之間相比差異不顯著無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。OPN與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.82，P<0

10、.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1、膠質(zhì)瘤中OPN、MMP-9、MVD的表達(dá)顯著高于正常腦組織。OPN、MMP-9、MVD在高級(jí)別腫瘤組的表達(dá)明顯高于低級(jí)別組。
　　 2、OPN與MVD的表達(dá)關(guān)系密切，MMP-9與MVD的表達(dá)關(guān)系密切。在低級(jí)別組中，同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)OPN、MMP-9的MVD值顯著高于只有一個(gè)陽(yáng)性表達(dá)和都陰性表達(dá)的MVD值，提示OPN與MMP-9在膠質(zhì)瘤的新生血管的產(chǎn)生中起重要作用，并可能有協(xié)同作用。