復(fù)方“別敏”中黃芩苷—淫羊藿苷—黃芪甲苷配伍比例的優(yōu)化研究.pdf

1、背景:變應(yīng)性鼻炎是鼻黏膜的慢性炎性反應(yīng)性疾病,全球約有10％-25％的人罹患該病,發(fā)病率呈逐年增高趨勢(shì),且變應(yīng)性鼻炎是繼發(fā)哮喘的重要危險(xiǎn)因素。中醫(yī)藥在防治變應(yīng)性鼻炎方面具有悠久的歷史和獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。中藥復(fù)方“別敏”是本課題組自擬的治療變應(yīng)性鼻炎的有效方劑,由黃芪、黃芩、淫羊藿、防風(fēng)、五味子、烏梅肉、銀杏葉、補(bǔ)骨脂、白芷、地黃、黃精11味中藥組成,扶正與祛邪并舉,融收斂于發(fā)散之中,突出顯示了傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療變應(yīng)性鼻炎的特色。經(jīng)澳大利亞悉尼大學(xué)

2、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí),“別敏”在改善變應(yīng)性鼻炎患者臨床癥狀、降低血清IgE水平等作用方面療效確切。隨后十多年的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步揭示,“別敏”可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)分泌、免疫功能發(fā)揮治療作用。我們的前期研究還發(fā)現(xiàn),“別敏”中的單體成分黃芩苷、淫羊藿苷和黃芪甲苷亦可調(diào)節(jié)免疫功能。中藥復(fù)方配伍需遵守組方規(guī)則及合適的配伍比例。作為“別敏”中抗變應(yīng)性炎癥的已知主要單體成分,黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷按照何種比例配伍可提高療效、降低用量是一個(gè)

3、有重要價(jià)值的問(wèn)題,但沒(méi)有相關(guān)研究。因此本研究旨在明確該比例,并為探索中藥單體小復(fù)方的研究模式打下基礎(chǔ)。
　　目的:優(yōu)化復(fù)方“別敏”中黃芩苷(BA)、淫羊藿苷(ICA)與黃芪甲苷(ASI)三種有效成分合用的配伍比例。
　　方法:首先采用Balb/c小鼠卵清蛋白腹腔注射和滴鼻攻擊建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型。造模結(jié)束后,無(wú)菌取脾,分離脾臟淋巴細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng),將細(xì)胞分為對(duì)照組、ConA組(用ConA刺激)、黃芩苷、淫羊藿苷和黃芪甲苷

4、不同濃度組,以脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)為指標(biāo),利用XTT法分別確定黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷的有效劑量范圍;其次選用U*10(108)表組方設(shè)計(jì)所得的10種中藥組合進(jìn)行干預(yù),將脾淋巴細(xì)胞分為對(duì)照組、ConA組、不同中藥劑量組合組,考察不同中藥劑量組合對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng),結(jié)果經(jīng)逐步回歸統(tǒng)計(jì)分析,得出回歸方程,通過(guò)網(wǎng)格法求得三成分合用的優(yōu)化配比;最后以此配伍分別與黃芩苷、淫羊藿苷和黃芪甲苷比較,利用淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和IL-4、IL-5、I

5、FN-Y細(xì)胞因子水平檢測(cè)對(duì)上述優(yōu)化配伍結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:在確定三種有效成分各自有效劑量范圍的研究中,ConA組OD值明顯高于對(duì)照組(P＜0.01),黃芩苷和黃芪甲苷在極低濃度時(shí)(0.003-0.016μM)OD值較ConA組高(P＜0.05或P＜0.01),當(dāng)黃芩苷或淫羊藿苷濃度達(dá)到2～10μM,黃芪甲苷濃度達(dá)1～10μM時(shí),OD值較ConA組低(P＜0.05或P＜0.01)。這表明:黃芩苷、淫羊藿苷和黃芪甲苷分別在2～1

6、0μM,2～10μM和1～10μM劑量范圍內(nèi)明顯抑制致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖。
　　在尋找三種有效成分優(yōu)化配伍比例的研究中,均勻?qū)嶒?yàn)各劑量組對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響經(jīng)逐步回歸分析統(tǒng)計(jì),擬合回歸方程:OD值=—59.59659+7.73626×BA+13.97243×ICA—0.23033×BA2—0.75713×ICA2+0.00957×ASI2—0.79014×BA×ICA—0.01608×BA×ASI(決定系數(shù)為R2=0.88

7、87),該回歸方程經(jīng)F檢驗(yàn),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。由于OD值最小時(shí)表明三成分合用對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的抑制最明顯,通過(guò)網(wǎng)格法求極值,得出B=6.23μM,I=8.93μM,A=9.37μM時(shí),OD值最小,即當(dāng)黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷的質(zhì)量比為1:2.14:2.65時(shí),抑制效應(yīng)最明顯。通過(guò)分別求OD值對(duì)黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷濃度的偏導(dǎo)數(shù),發(fā)現(xiàn)三種有效成分依上述比例合用時(shí),淫羊藿苷起主要作用,黃芩苷的作用稍弱,而黃芪甲苷的作

8、用最小。
　　驗(yàn)證研究顯示,在淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)中,ConA組OD值較對(duì)照組顯著增高(P＜0.01),黃芩苷組、淫羊藿苷組、黃芪甲苷組分別采用與優(yōu)化配伍組中各成分相同的劑量,但優(yōu)化配伍組抑制淋巴細(xì)胞增殖的效果明顯優(yōu)于各有效成分單用(P＜0.05或P＜0.01)。在細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ的測(cè)定中,ConA組IL-4.、IL-5、IFN-γ水平均高于對(duì)照組(P＜0.01);黃芩苷組、淫羊藿苷組、黃芪甲苷組及優(yōu)化配伍組IL

9、-4、IL-5水平均較ConA組低,IFN-γ水平均較ConA組高(P＜0.01);優(yōu)化配比組對(duì)淋巴細(xì)胞上清液中IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-4/IFN-γ的調(diào)節(jié)作用又明顯優(yōu)于黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷單用(P＜0.05或P＜0.01)。
　　結(jié)論:復(fù)方“別敏”中主要有效成分黃芩苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷按優(yōu)化比例合用可有效地抑制致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)因變態(tài)反應(yīng)引起Th1、Th2型細(xì)胞因子失衡,為本單體小復(fù)方的深入研究奠