肝臟缺血再灌注損傷的機理及防治的實驗研究.pdf

1、目的： (1)初步探討確定肝臟缺血/再灌注損傷程度的意義和指標選擇。 (2)結(jié)合肝臟缺血/再灌注損傷程度，觀察缺血/再灌注損傷對大鼠肝細胞凋亡與增殖及其信號傳導(dǎo)的影響。 (3)觀察重組bcl-xL-cDNA腺病毒預(yù)處理對大鼠肝臟冷保存和缺血/再灌注損傷的保護作用。 方法： (1)建立大鼠肝臟局部缺血/再灌注模型，測定缺血60、90 min/再灌注0、1、2、4、6、12、24、48h時的血清丙氨酸

2、轉(zhuǎn)氨酶(Aaminotransferase，ALT)水平和病理檢查(相對細胞死亡率)。參照本院缺血/再灌注損傷分級標準重新將實驗動物分為4個不同的損傷程度組后分析ALT水平與病理改變的關(guān)系。 (2)建立大鼠肝臟局部缺血/再灌注模型，測定缺血60min/再灌注0、1、2、4、6、12、24h時的血清ALT水平、病理檢查、原位雜交法檢測肝細胞的相關(guān)基因(c-mycmRNA、FasmRNA、bcl-2mRNA)的相對含量、流式細胞儀檢

3、測肝細胞的Ki-67陽性率和PI陽性率。參照我院肝臟缺血/再灌注損傷分級標準重新將實驗指標分為4個不同的損傷程度組后分析各項指標的變化規(guī)律。 (3)重組bcl-xL-cDNA腺病毒預(yù)處理后，用流式細胞儀檢測方法，對比觀察冷保存24h、48h和缺血60min/再灌注0、12h時大鼠肝細胞Ki-67陽性率和PI陽性率：對比觀察病理改變。 結(jié)果： (1)各樣本在大鼠肝臟缺血/再灌注損傷的各程度組中占的比例是：缺血60m

4、in組為輕度75％、中度14.6％、重度10.4％；缺血90min組為輕度41.7％、中度25％、重度16.7％、嚴重16.7％。損傷程度越重細胞死亡率也越高。 (2)各項指標隨著大鼠肝臟缺血/再灌注時間的延長有明顯的改變。FasmRNA含量在再灌注4h時出現(xiàn)低谷，bcl-2mRNA含量在再灌注12h時出現(xiàn)低谷，細胞增殖率在再灌注6h時達到高峰，細胞凋亡率在再灌注12h時出現(xiàn)高峰；在中度缺血再灌注損傷組的大鼠肝細胞凋亡率和細胞增

5、殖率明顯升高，其相關(guān)bcl-2 mRNA含量明顯下降；重度組的細胞死亡率明顯增高。 (3)冷保存時實驗組和對照組的大鼠肝細胞Ki-67陽性率和PI陽性率無明顯差別：缺血/再灌注時實驗組大鼠肝細胞PI陽性率在缺血60min/再灌注0、12h時明顯低于對照組，但Ki-67陽性率無差別，實驗組的病理改變明顯輕于對照組。 結(jié)論： (1)肝功能血清轉(zhuǎn)氨酶水平可直接反映肝臟缺血/再灌注損傷程度，損傷程度越重，其轉(zhuǎn)氨酶水平越高